第三章第一节 植物器官培养.ppt

;一、植物器官培养及类型 植物器官培养（Organ Culture）是指离体条件下对植物体的不同器官进行培养，并再生植株的过程，主要包括离体根、茎、叶、果实、种子、花器官的培养。 其中离体茎的培养（包括茎尖、茎段及节间）和叶片培养（包括叶片和叶柄）应用的较为广泛。 ;二、植物茎尖培养： 茎尖培养（shoot tip culture）的含义比较广，包括小到10－100um的茎尖分生组织，大到几十毫米的茎尖或更大的芽。一般材料体积小或不带叶原基的茎尖分生组织培养较困难，成苗所需时间较长，而培养材料体积越大，成苗速度越快。 茎尖培养在植物组织培养中广泛应用，主要用于种苗快速繁殖，进行脱毒苗的生产，品种改良和基础理论研究。;;茎尖培养的阶段划分： 1、起始培养阶段：Initiation 2、增殖培养阶段：Multiplication 3、生根培养阶段：Rooting 4、驯化移栽阶段：Acclimatization; （一）外植体（explant）的起始培养 起始培养阶段为无菌体 系的诱导和建立过程。主要 受外植体、培养基以及环境 条件等的影响。; 1、起始培养的一般过程： A、选取适宜的基因型（品种）； B、选取适宜的茎尖外植体； C、流水冲洗外植体； D、外植体切割、分离及灭菌处理；75％乙醇和0.1%的HgCl2。 E、外植体接种于诱导培养基；添加细胞分裂素。 F、 控制环境条件促进外植体的生长。;2、接种茎尖外植体的生长过程： A 细胞分裂的启动； B 细胞增殖； C 组织和器官的形成。 ;3、离体茎尖的发育方向： A 腋芽萌发进行增殖； B 脱分化形成不定器官； C 脱分化形成形成胚状体； D 脱分化形成愈伤组织。 ; 4、影响茎尖外植体起始培养的因素： （1） 外植体的遗传基础及生理 （2） 培养基组成成分 （3） 培养条件 ; （1）外植体 外植体种类及基因型 外植体供体植株和外植体的生理状态 外植体大小 外植体的极性;单子叶植物不易诱导器官发生。 b. 木本植物较难诱导。 c. 存在基因型差异（如番茄29%~63%） d. 开始生长季节取材容易诱导。;外植体大小??? 外植体越小成苗能力越弱，较大的外植体增殖较快。 外植体极性： 当外植体以形态学的基部接种于培养基上时，从远离基部的表面诱导出芽、苗数目较多。;;（2）培养基 A 培养基类型: MS、B5、White B 碳 源的影响: 蔗糖、葡萄糖等 C. 植物生长调节物质 细胞分裂素、生长素类、赤霉素类、其他有机化合物 ;a.部分植物单独使用细胞分裂素（CTK）可以形成 无根苗 b.部分植物无根苗的形成需要细胞分裂素和生长素配合使用。 c. 外源CTK与生长素必须维持适当比例以改变内源激素平衡，促进器官发生。 d. 不同细胞分裂素对分化的作用效果不同。 ;赤霉素类： 赤霉素与促进细胞伸长和开花反应，组织培养条件下只在少数植物上对芽的诱导有促进作用。 如马铃薯、甜菜、樱桃等。 ;其他有机化合物： 腺嘌呤衍生物具有促进器官分化作用。 椰子汁等物质也具有促进分化的功能。;（3） 培养条件及其他因素 A 光照 通常1000~5000 Lx 16 小时光照。 洋葱 16小时，马铃薯连续光照，葡萄要求短日照。 光质也影响芽的再生，蓝光有利于器官发生，烟草实验，而红光有利于根的发生。 ;B、温度 大部分植物要求25 oC，少数要求较低温度（15 ~ 20 oC）或较高的温度（30 oC ） 如菖蒲、水仙、洋葱、龟背竹等。 变温处理对有些植物器官发生有促进作用，如豌豆。 ; C、 培养基其他因素： 如活性炭（Activated Charcoal）、酚类物质（Phenolic compounds）、pH值、继代培养次数（subculture）、渗透压等。 ;（二）无菌苗的增殖;蝴蝶兰的增殖培养;无菌苗增殖培养; （1）细胞分裂素浓度直接影响增殖的效果，通常使用浓度低于起始培养阶段。 高浓度细胞分裂素会导致植株玻璃化（Vitrification）等现象的发生，过低的浓度会影响增殖速率，因此应选择适宜的浓度。 （2）添加少量的