實验七 聚合酶链式反应（PCR）技术.pptVIP

实验七 聚合酶链式反应（PCR）技术 ;1. 实验目的 2. 实验原理 3. 实验仪器、材料与试剂 4. 实验步骤 5. 实验结果与讨论 ;实验目的;实验原理;PCR：变性－退火－延伸;PCR;; 反应分为三步： 1.变性：在高温条件下，DNA双链解离形成单链DNA； 2.退火：当温度突然降低时引物与其互补的模板在局部形成杂交链； 3.延伸：在DNA聚合酶、dNTPs和Mg2+存在的条件下，聚合酶催化以引物为起始点的DNA链延伸反应。 以上三步为一个循环，每一循环的产物可以作为下一个循环的模板，几十个循环之后，介于两个引物之间的特异性DNA片段得到了大量复制，数量可达到~106~7个拷贝。 ;PCR技术的参数主要有7个： 聚合酶、引物、dNTPs、反应buffer、二价离子、模板、一价离子。 ;实验仪器、材料与试剂;（二）材料 模板DNA ;（三）试剂 1. 10x PCR buffer 2. dNTPs 2.5mM 3. Taq 酶 5u/μl 4. 引物1和2( 2μmol/L) (T3,T7) 5. 模板;实验步骤;2. 按下述循环程序进行扩增 94℃ 5分钟，1个循环； 94℃ 30秒，52℃ 30秒，72℃ 30秒，30个循环； 72℃ 延伸10 分钟。 4℃保温。 ;3. 扩增结束后取50μl扩增产物，利用琼脂糖电泳检测DNA扩增情况,并切胶