實验四 兔抗SRBC免疫血清的纯化.pptVIP

实验四 兔抗SRBC免疫血清的纯化; 抗血清纯化的目的是尽量除去抗血清中与目的抗体不相关的成分。 ??? 抗血清纯化的方法主要有粗提法和精制法两个过程。 粗提法主要常用硫酸铵盐析法 精制法分非特异性和特异性两种类型。 非特异性方法如葡聚糖凝胶过滤法、离子交换 层析法，其方法均系基于蛋白质分子的物理性质。 特异性方法如免疫吸附法，其方法基于抗原抗 体的特异性反应。 ;实验目的：;实验原理:; 当用中性盐加入蛋白质溶液，中性盐对水分子的亲和力大于蛋白质，蛋白质分子周围的水化膜层减弱乃至消失。同时，中性盐加入蛋白质溶液后，由于离子强度发生改变，蛋白质表面电荷大量被中和，更加导致蛋白溶解度降低，使蛋白质分子之间聚集而沉淀。 在溶液中加入中性盐使生物大分子沉淀析出的过程称为“盐析” ; 常用的中性盐中最重要的是（NH4）2SO4，因为它与其他常用盐类相比有十分突出的优点： ? 溶解度大；分离效果好；不易引起变性； 价格便宜；废液不污染环境。 ; 蛋白质由于分子质量和携带的电荷不同，可在不同浓度的高盐溶液内分级析出。 pH7: 50%饱和硫酸铵，可沉淀出所有类型Ig； 33%饱和硫酸铵，可沉淀出大部分分Ig