實验四 外源基因在大肠杆菌中的诱导表达及鉴定.pptVIP

实验四 外源基因在大肠杆菌中的诱导表达及鉴定;【实验目的】 ;【实验原理】 ;（1）大肠杆菌表达系统的特点： 生物学特性和遗传背景清楚，易于操作； 已开发较多的克隆载体可供选择； 容易获得大量的外源蛋白（外源蛋白可占细菌总蛋白50％左右）。;（2）蛋白质在原核细胞中的表达特点： 原核细胞有其固有的RNA聚合酶，识别原核基因的启动子。 原核基因的mRNA含有SD序列，启动蛋白质的合成。 原核细胞没有mRNA转录后加工的能力。因此，在原核细胞中表达真核基因时，应使用cDNA为目的基因。??????;（2）蛋白质在原核细胞中的表达特点;（3）蛋白质在原核细胞表达的调控;（4）蛋白质在原核细胞中的表达形式;非融合蛋白;融合蛋白;分泌型表达;2.乳糖操纵子的调节机制;（1）乳糖操纵子的诱导表达 ;（1）乳糖操纵子的诱导表达;本实验采用已???构建好的表达载体 pET24a，转化到感受态细胞BL21starTM(DE3)plysS， 经IPTG的诱导，实现外源基因（非限制性核酸酶）的表达，并通过SDS对表达产物进行检测。 ;【试剂与器材】 ;（二）器材超净工作台、恒温振荡器、台式高速离心机、高速冷冻离心机、低温摇床。 （三）菌株工程菌BL21starTM(DE3)plysS-PET24a;【实验步骤】;思考题