實验六 目的基因的PCR扩增.pptVIP

实验六 目的基因的PCR扩增 ;一、实验目的;PCR（polymerase chain reaction) ： 聚合酶链式反应，又称体外DNA扩增技术。 是一种体外扩增特异DNA片段的技术。;二、实验原理;二、实验原理;5’ 3’;二、实验原理; PCR 的基本反应步骤;二、实验原理;二、实验原理;PCR：变性－退火－延伸;PCR;二、实验原理;温度（℃）;二、实验原理;二、实验原理;三、实验仪器与试剂;四、实验步骤 ;3、按下述循环程序进行扩增 94℃×3分钟，1个循环 94℃ ×30秒，56℃×30秒，72℃×1分钟，30个循环 72℃ 延伸10 分钟 4℃保温 4、扩增结束后取10μl扩增产物，利用1.2%琼脂糖 电泳检测DNA扩增情况 ;五、实验结果;六、PCR反应条件的优化; （2）复性温度和时间： PCR扩增特异性取决于复性过程中引物与模板 的结合。 复性温度的选择，可根据引物的长度和G+C含量确定，长度在15 ～ 25 bp 之间时，复性温度 Tm = 4 (G+C) +2 (A+T) 计算得到，一般位于40 ～ 60℃，30 ～ 60 s。 复性温度越高，产物特异性越高。复性温度越低，产物特异性越低。 一般情况下选择5