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蛋白质,表达,纯化,实验蛋白质,表达,纯化,实验
HYPERLINK /experiment/79.htm 蛋白质的表达、分离、纯化实验
蛋白质表达、分离、纯化可以：（1）探索和研究基因的功能以及基因表达调控的机理；（2）供作结构与功能的研究；（3）作为催化剂、营养剂等。
实验方法原理
携带有目标蛋白基因的质粒在大肠杆菌BL21中，在 37℃，IPTG诱导下，超量表达携带有6个连续组氨酸残基的重组氯霉素酰基转移酶蛋白，该蛋白可用一种通过共价偶连的次氨基三乙酸（NTA）使镍离子（Ni2+）固相化的层析介质加以提纯，实为金属熬合亲和层析（MCAC）。蛋白质的纯化程度可通过聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分析。
实验材料： HYPERLINK /product/s?wd=%E5%A4%A7%E8%82%A0%E6%9D%86%E8%8F%8CBL21 \t _blank 大肠杆菌BL21
试剂、试剂盒： HYPERLINK /product/s?wd=LB%E6%B6%B2%E4%BD%93%E5%9F%B9%E5%85%BB%E5%9F%BAt=3 \t _blank LB液体培养基、 HYPERLINK /product/s?wd=%E6%B0%A8%E8%8B%84%E9%9D%92%E9%9C%89%E7%B4%A0t=3 \t _blank 氨苄青霉素、 HYPERLINK /product/s?wd=Washing+Buffert=3 \t _blank Washing Buffer HYPERLINK /product/s?wd=Elution+Buffert=3 \t _blank Elution Buffer HYPERLINK /product/s?wd=IPTGt=3 \t _blank IPTG 、 HYPERLINK /product/s?wd=%E8%92%B8%E9%A6%8F%E6%B0%B4t=3 \t _blank 蒸馏水 、 HYPERLINK /product/s?wd=%E8%83%B0%E8%9B%8B%E7%99%BD%E8%83%A8t=3 \t _blank 胰蛋白胨 、 HYPERLINK /product/s?wd=%E9%85%B5%E6%AF%8D%E7%B2%89t=3 \t _blank 酵母粉、 HYPERLINK /product/s?wd=%E6%B0%AF%E5%8C%96%E9%92%A0t=3 \t _blank 氯化钠
仪器、耗材： HYPERLINK /product/s?wd=%E6%91%87%E5%BA%8At=1 \t _blank 摇床 、 HYPERLINK /product/s?wd=%E7%A6%BB%E5%BF%83%E6%9C%BAt=1 \t _blank 离心机、 HYPERLINK /product/s?wd=%E5%B1%82%E6%9E%90%E6%9F%B1t=1 \t _blank 层析柱、 HYPERLINK /product/s?wd=%E7%A6%BB%E5%BF%83%E7%AE%A1t=1 \t _blank 离心管、 HYPERLINK /product/s?wd=%E7%A7%BB%E6%B6%B2%E6%9E%AAt=1 \t _blank 移液枪、 HYPERLINK /product/s?wd=%E6%9E%AA%E5%A4%B4%E7%9B%92t=1 \t _blank 枪头盒 、 HYPERLINK /product/s?wd=%E7%83%A7%E6%9D%AFt=1 \t _blank 烧杯 、 HYPERLINK /product/s?wd=%E7%8E%BB%E7%92%83%E6%A3%92t=1 \t _blank 玻璃棒
实验步骤
一、试剂准备 ?
1. ?LB液体培养基：Trytone 10 g， yeast extract 5 g，NaCl 10 g，用蒸馏水配至1000 mL。 ?
2. ?氨苄青霉素：100 mg/mL。 ?
3. ?上样缓冲液：100 mM NaH2PO4，10 mM Tris，8M Urea，10 mM ?2-ME，pH8.0。 ?
4. ?Washing Buffer：100 mM NaH2PO4，10 mM Tris，8 M Urea，pH6.3。 ?
5. ? Elution Buffer：100 mM NaH2PO4，10 mMTris，8M Urea， 500 mM Imidazole， pH8.0。 ?
6. ? IPTG：100mM IPTG（异丙基硫代-β-D-半乳糖苷）：2.38g IPTG溶于100ml ddH2O中,0.22μm滤膜抽滤，-20℃保存。
二、获得目的基因
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