0404动物细胞大规模培养方法和其应用.pptVIP

Section 4：Scaling-up of cell culture 动物细胞的大规模培养; 动物细胞大规模培养技术失建立在贴壁培养法和悬浮培养法基础上，再融合了固定化细胞、填充床、生物反应器技术以及人工灌流等技术而发展起来的。 主要包括： 悬浮培养 微载体培养 微囊化培养 中空纤维法;1、悬浮培养 动物细胞的悬浮培养是在微生物发酵的基础上发展起来的。动物细胞没有细胞壁保护，不能耐受剧烈的搅拌和通气。 对于小规程培养多采用转瓶和滚瓶培养，大规模培养多采用发酵罐式的细胞培养反应器。 悬浮培养，设备结构简单，有成熟的理论计算，可以借鉴微生物发酵的部分经验，放大效应小。 但是悬浮培养的细胞密度较低，转化细胞悬浮培养有潜在致癌危险，培养病毒易失去病毒标记而降低免疫强力。此外，有许多动物细胞属于贴壁依赖性的，不能悬浮培养。 悬浮培养的关键是要选择适当的搅拌和通气装置. ;2、微载体培养系统 贴壁依赖性动物细胞的培养，最初是采用滚瓶系统，其结构简单、投资少，技术成熟，重现性好，放大只是简单地增加该瓶数。但是，滚瓶系统劳动强度大，单位体积提供细胞生长的表面积小。为了克服这些不利因素，1967年，van wezell开发了微载体系统培养贴壁依赖性细胞。微载体是直径为60~250μ m的微珠。采用微裁体系统培养动物细胞，细胞贻壁于微载体上，微载体(和细胞)悬浮于培养基中，细胞在微载体表面逐渐生长成单层。;1967年，Van Wezel开发了微载体系统培养贴壁细胞。 微载体是直径60-250μm的微珠。多用带不同基团的葡聚糖交联成几种大分子，使其带有适当电荷或介质，以利于细胞的贴壁及生长。 ; 这种模式，把单层培养和悬浮培养的优点融汇在一起，具有两种培养方法的优点。 1) 表面积／体积比大 2) 由于微裁体悬浮于培养基中，是均匀悬浮 培养，简化了细胞生长各种环境因素的监测和控制。 3) 培养基利用率高。 4) 采样重演性好。 5）收获过程不复杂。 6) 放大较容易。 7) 劳动强度小，占用空间小;与微载体结合的生物反应器系统;收获细胞 接种——球传球;3、包埋培养 悬浮生长??对贴壁依赖生长的细胞都适用，细胞生长的密度高，抗剪切力和抗污染能力强。对悬浮生长的细胞用海藻酸钙包埋，对贴壁依赖生长细胞用胶原包埋。由于动物细胞培养慢而费有高，且对剪切力敏感， 经包埋后可有效的保护细胞。 ;4、微囊化培养 在动物细胞微囊化的制备中，主要是应用海藻酸—聚氨基酸的方法，简单过程是动物细胞与海藻酸溶液混合搅拌，经过微囊发生器将微球滴入氯化钙溶液中，形成凝胶，然后再用聚氨基酸处理，使微球表面成膜，最后用柠檬酸处理去除微球内的钙离子，以便球内的海藻酸成液态，动物细胞得以悬浮在其中。动物细胞的微囊化中海藻酸和聚氨基酸是关键材料。 微囊化方法能使细胞处于相对稳定、受剪切力小的环境中，而养分和氧又可以从微囊外的培养液扩散进入。;5、中空纤维培养系统;;自学：;1000L气升式细胞反应器 系统;中空纤维反应器：左右两箭头为无菌空气进出口。细胞生长在由半透性的多孔膜制成的中空纤维中外表面。;其中关键的是一个笼式撑拌器。笼式通气装置的特点主要是可以避免在向培养基中通气时，气泡不会直接损伤细胞。（因为气泡已被上部的200目丝网机械的破坏了。同时，在采用微教体系统培养时，微载体不会被由于通气所产生泡沫所裹抉在气液界面。 导流筒随搅拌同步转动（30~60rpm)时，由于离心力的作用，使搅拌器中心管内产生负压，迫使搅拌器外培养基流入中心管，沿管螺旋上升，再从三导 流筒口排出，绕搅拌器外缘螺旋下降，培养基和悬浮的细胞或附着细胞或微载体反复循环。由流体搅拌加流体循环，使反应器内流体混和相当好。; 无泡搅拌反应器是一种装有膜搅拌器的生物反应器，这种反应器的开发和应用在生产中同时解决了通气和均相化的要求。无泡搅拌反应器采用多孔的疏水性的塑料管装配成通气搅拌桨。由于选用多孔塑料管具有良好的氧通透性，从而实现无泡通气搅拌。由于这类反应器能提供动物细胞生长中所需的溶氧要求，产生的 剪切力较小以及在通气中不产生泡沫，避免了在其它反应器中常见的某些弱点，如泡队等，因而己广泛地应用于实验室研究和中试工业生产。 膜由聚丙烯或其它材料制成，它被加工成多孔的管。在多孔管内的气体压力不能超过鼓泡压力，即气泡在膜外表面出现的静止内压。对于不湿润的硫水膜，相对于水的气泡压力约在13X10’Pa。上述这一要求是容易实现的，即加在管上的压力 应比管内流动压力降和气泡压力的总和高出10％。在那种情况下，就