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浅谈博士后基金申请;第四章 申报评审;一、选 题;选 题;二、个人及申报项目基本信息;摘要;摘 要 ;三、项目立论依据 ;3、项目创新之处（粗细处理）;4、参考文献 （新、全、高）;;需要注意的问题;申请者的研究前期工作进展及进一步的研究方向 我们的前期研究也发现，两个NAC 同源基因可能参与了大豆种子发育的进程（Meng et al, in press）。本项目组应用生物信息学结合分子克隆技术从大豆中分离了6 个NAC 同源基因(GmNAC1 -GmNAC6)。组织表达分析表明，GmNAC1 主要表达于根和花芽， GmNAC2 主要表达于叶片、茎和发育中的种子，GmNAC3 在花芽中强烈表达，在种子中表达较弱。GmNAC4 和GmNAC6 则表现为组成型表达。GmNAC5 主要表达于发育中的大豆种子，在花芽和荚皮中也有微弱的表达。进一步分析发现：GmNAC2和GmNAC5 都在大豆种子代谢旺盛时期即30-35DAF 的表达量最高，表明这两个基因的表达可能与种子发育状态 密切有关，但它们是如何参与调节大豆种子发育进程的？有哪些基因参与调节？目前还不清楚，需要进一步深入研究。 ;四、项目研究方案; ; ;3、拟解决的关键问题 1）目前对于NAC 基因家族的研究报道多集中在模式植物的胚胎发育以及耐逆方面作用。对于大豆而言，由于其种子含有高蛋白和高油份（其种子组成与拟南芥明显不同），NAC 基因在大豆种子发育过程中具体作用还不清楚，因此，本项目拟解决的关键问题之一是阐明NAC 基因在大豆种子发育过程中的生物学功能。 2）我们的前期研究表明，GmNAC2 和GmNAC5 在种子中表达量较高，而在其他组织中表达量相对较少，且在种子不同发育时期的表达量也不同。但对这两个基因之间及它们与其他基因间的关系还一无所知。因此，本项目拟解决的关键问题之二是在转基因研究的基础上，结合基因芯片和蛋白质组技术，探明GmNAC2 和GmNAC5 以及它们与其他基因间的关系。 ;研究目标 本课题以诱变产生的低植酸种质为材料，采用生物技术、生物信息学、现代仪器分析技术和传统的育种手段相结合的方法，对其进行了系列研究，预期目标如下： 1、精细定位两个突变基因，获得与其连锁的分子标记，遗传距离1.0 cM，为标记辅助选择、图位克隆或通过比较基因组分析确定候选基因打下基础。 2、明确两个低植酸突变单独使用和组合使用的育种价值。 （三）拟解决的关键问题 通过本项目的实施，获得可以用于提高大豆营养品质、对农艺和其它品质性状又没有负面效应的低植酸突变基因，找到与其紧密连锁的分子标记。 ; 研究内容 本项目主要开展TW lpa1-2 和 ZC lpa2-1 两个低植酸突变基因的定位和育种价值的研究。包括 1、 微卫星标记初步定位突变基因。（太粗） 2、 突变基因目标区段多态性标记的挖掘，并用于该区段分离单株的HAPLOTYPE 分析，从而完成突变基因的精细定位。 3、 通过突变种质和常规品种杂交后代群体中，低植酸和野生型株系的产量、种子田间出苗率和品质性状（低聚糖、脂肪酸含量和组分）的比较分析，研究两个独立的低植酸突变是否对上述性状具有负面影响；确定两个突变基因在大豆营养品质改良中的价值。 4、 利用分子标记辅助选择，获得携带两个突变基因的纯合株系，通过分析其植酸含量、农艺和品质性状表现，确定两个突变基因组合使用时的效果。;4、拟采取的研究方法 详细叙述或引用文献 ;5. 技术路线（标出基础，不能太复杂）;6、研究方案 1） 蛋白质亚细胞定位：GmNAC2 与GFP 基因融合后的Gateway 载体pMDC44 系列(Curtis Grossniklaus,2003,Plant Physi, 133:462-469), 用农杆菌介导的方法进行洋葱表皮细胞的瞬时表达，结合激光共聚焦显微镜分析，研究GmNAC2 编码产物的亚细胞定位。 2）蛋白质转录活性分析 3）基因表达分析（原位杂交） 4）转基因大豆的获得与分析 5）基因芯片分析 6）GmNAC2 和GmNAC5 下游基因的鉴定 7）蛋白质组分析 ;目前有关NAC 基因在大豆种子发育过程中功能尚不清楚，但申请者已克隆了两个可能与种子发育相关的NAC 基因，为进一步研究准备了基础材料和信息。 转基因大豆的培育是本项目实施的重要环节，本实验室经过10 多年的摸索，已经建立了较稳定大豆遗传转化体系，经Southern 杂交验证，可以获得1%左右的转化效率（Yi Yu, 2006）。此外, 我们也在大