5逆境胁迫水稻幼苗和其生理指标分析.pptxVIP

《植物生物学实验》逆境胁迫水稻幼苗及其生理指标分析;实验一：水稻幼苗对盐胁迫的反应 实验二：用氮蓝四唑法测定植物超氧化物歧化酶活力; 一、实验目的;二、实验原理;逆境胁迫对植物伤害的表现;植物对逆境胁迫的适应;生理变化： 1. 生物膜结构改变，形成胁迫蛋白，如热激蛋白、抗冻蛋白等。 2. 保护酶系统受破坏 由超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)等组成的保护酶系统会降低或消除活性氧的危害。 正常情况下，细胞内自由基的产生和清除处于动态平衡状态，自由基水平很低，不会伤害细胞。 遭受逆境胁迫时，细胞内自由基积累过多，SOD等保护酶系统被破坏，产生许多有害的过氧化产物如丙二醛等，会伤害细胞。自由基会破坏膜结构，损伤大分子生命物质，引起一系列生理生化紊乱，导致植物死亡。;; 活性氧：阴离子自由基、羟基自???基(-OH)、过氧化氢(H2O2)、单线态氧(1O2)，具有很强的氧化能力、对许多生物功能分子有破坏作用、引起膜的过氧化作用。 自由基：具有未配对价电子的原子或原子团。 天然的非酶自由基清除剂有维生素E、谷胱甘肽、抗坏血酸、类胡萝卜素等。 3. 增加渗透调节物质，有利吸水：糖、有机酸、一些无机离子如K+，其中脯氨酸是最有效的。 4. 增加脱落酸(ABA)含量。;植物盐胁迫;植物对盐胁迫的适应;盐生植物的避盐机制;泌盐的红树植物（盐腺）;稀盐的碱蓬（肉质化）;拒盐的盐生植物;植物盐胁迫的伤害表现;三、实验试剂与材料;四、实验步骤;五、实验分组;《植物生物学实验》逆境胁迫水稻幼苗及其生理指标分析 实验二：用氮蓝四唑（NBT）法测定植物超氧化物歧化酶（SOD）活力;一、实验目的;二、实验原理;SOD测定方法;;在有氧化物质存在下，核黄素可被光还原，还原的核黄素极易再氧化而产生氧自由基，可将氮蓝四唑还原为蓝色的甲腙，甲腙在560nm处有最大吸收。而SOD可清除氧自由基，从而抑制了甲腙的形成。 光还原反应后，反应液蓝色愈深，说明酶活性愈低，反之酶活性愈高。据此可以计算出酶活性大小。;核黄素：在有氧物质存在下，还原的核黄素与氧反应产生氧自由基。 氮蓝四唑(NBT)：氧自由基将无色(或微黄)的NBT还原为蓝色甲腙。 甲硫氨酸：电子供体——提供核黄素的还原反应所需的电子供体，使得核黄素的光激发还原反应得以进行。 SOD酶：SOD通过催化氧自由基歧化反应，生成O2与H2O2，从而抑制蓝色甲腙形成。SOD催化反应如下：;（1）在一定盐度的胁迫下，植物叶片中SOD活性随盐浓度的升高而增强。 （2）SOD酶能有效抑制膜脂过氧化作用，具有一定的保护作用。因此，盐胁迫的损伤在一定范围内是可以修复。 膜系统的修复与SOD、CAT、POD等抗氧化酶的活性和抗坏血酸(ASA)、谷胱甘肽(GSH)等抗氧化物含量的变化密切相关。;二、实验材料、仪器与试剂;主要试剂配制（供参考）： （1）50mmol/L 磷酸钠缓冲液（pH7.8）： A液：NaH2PO4 · 2H2O（分子量156.01）： 3.12g溶于蒸馏水，定溶至100ml。 B液：Na2HPO4 · 12H2O（分子量358.14）： 7.17g溶于蒸馏水，定溶至100ml。 取A液8.5ml与B 液91.5ml混合，定容至400ml，pH7.8。 ? （2）SOD提取液：50mmol/L磷酸缓冲液 [含0.1mmol/L EDTA；0.3%(w/v) Triton X-100；2-4%（w/v）聚乙烯聚吡咯烷酮（PVP ）, pH7.8]。 即每升磷酸缓冲液中加20g PVP，200μl 0.5mol/L的EDTA母液，3ml Triton X-100。 ; （3）14.5mmol/L 甲硫氨酸（分子量149.21）： 称2.163g溶于蒸馏水，定溶至1000ml(较难溶，需稍微加热）。 （4）2.25mmol/L NBT（分子量817.7）： 称92mg溶于50ml 50mM磷酸磷酸缓冲液（pH7.8），现配现用，避光保存。 （5）60μmol/L 核黄素（分子量376.36）： 称2.25mg溶于50ml 50mM磷酸磷酸缓冲液（pH7.8） ，现配现用，避光保存。 （6）3μmol/L EDTA-Na2（分子量372.24）： A、0.5mol/L ：称9.306g溶于蒸馏水，定容至50ml。 （注意：搅拌时用NaOH调pH至8.0才能完全溶解）。 B、0.5mmol/L ：取A液1ml用蒸馏水稀释定容至1000ml。 C、3μmol/L ：取B液3ml用磷酸缓冲液稀释定容至500ml。 ;三、实验步骤;2. 反应体系;3.