实验三琼脂糖凝胶电泳选编.pptxVIP

实验二、琼脂糖凝胶电泳;1、学习琼脂糖凝胶电泳分离DNA的原理和方法 2、检测质粒DNA的纯度、浓度和分子量 ;琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，沸水中溶解，45℃开始形成多孔性刚性滤孔，凝胶孔径的大小决定于琼脂糖的浓度。 DNA分子在碱性环境中带负电荷，在外加电场作用下向正极泳动。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效应与分子筛效应。不同DNA，其分子量大小及构型不同，电泳时的泳动率就不同，从而分出不同的区带。琼脂糖凝胶电泳法分离DNA，主要是利用分子筛效应，迁移速度与分子量的对数值成反比关系。 溴化乙锭(EB)为扁平状分子，在紫外光照射下发射荧光。EB可与DNA分子形成EB-DNA复合物，其发射的荧光强度较游离状态EB发射的荧光强度大10倍以上，且荧光强度与DNA的含量成正比。用肉眼观察，可检测到5 ng以上的DNA。（GoldviewI的原理可能类似） 质粒DNA有环状超螺旋、开环、和线性三种构型，电泳时其迁移率各不同(超螺旋 线性 开环)。;不同浓度琼脂糖凝胶的分离范围;上次实验提取的质粒 pSK（3 kb） 和MP3 （6 kb） ;该质粒载体用的是pUC的复制子，拷贝数能达到500-700个。;四、仪器设备;六、试剂;七、实验步骤;1、称取1 g琼脂糖加入盛有100 ml 0.5?TBE电泳缓冲液的250 ml三角瓶中，摇匀，用电子天平称三角瓶的总重量。在微波炉上加