高效液相色谱结果分析-第2讲.ppt

高效液相色谱;一、色谱数据处理 二、色谱图 三、色谱图名词术语 四、色谱峰检测 五、HPLC测定步骤与内容;一.色谱数据处理;色谱柱流出物通过检测器时所产生的响应信号对时间的曲线图, 其纵坐标为信号强度, 横坐标为时间;三.色谱图名词术语(1);切线峰宽(Peak Width, 峰宽):在峰两侧拐点处所作切线与峰底相交两点之间的距离. 半峰宽(Peak Width at Half Height):通过峰高的中点作平行于峰底的直线，此直线与峰两侧相交两点之间的距离 . 峰面积(Peak Area):峰与峰底之间的面积,又称响应值.;三.液相色谱图名词术语(3);保留体积(VR)(Retention volume): 组分从进样到出现峰最大值所需的流动相体积. 死体积(V0)(Dead volume): 不被固定相滞留的组分, 从进样到出现峰最大值所需的流动相体积. 调整保留体积：VR’＝VR－V0＝tR’ ? FC Fc: 流动相的流速 mL/min.;谱带扩展(Band Broadening): 由于纵向扩散,传质阻力等因素???影响,使组分在色谱柱内移动过程中谱带宽度增加的现象. ;三.液相色谱图名词术语(6);Excellent;三.液相色谱图名词术语(7);基线飘移;;图示中塔板数为3.;峰的检测和判别是依据在基线的讯号水平上，预设一个“阈值”，超过该值时，判别为峰可开始检测。一般采用下面两种方式判别峰讯号的变化：;五.HPLC 测定步骤与内容;1.确定色谱条件;2.绘制标准工作曲线;准确度 指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，用百分回收率表示。 相对回收率 直接反映测定结果与真实值的接近程度,应控制在100%左右(95%～105%)。 绝对回收率 模拟生物样品经整个样品处理过程,而相应标准溶液直接分析,两者的响应值之比称为绝对回收率。绝对回收率一般应大于70%,过低说明方法中待测物质损失严重。 测定回收率R（recovery）的具体方法可采用“回收试验法”和“加样回收试验法”。;(1)回收试验 空白+已知量A的对照品（或标准品）测定，测定值为 M;4.精密度(precision) ;5.检测限(limit of detection,LOD) ;指样品中被测物能被定量测定的最低量，结果应具有一定准确度和精密度要求。;7.专属性(specificity,或称选择性）;指达到一定精密度、准确度和线性的条件下，测试方法适用的高、低限浓度或量的区间。 范围的确定可因测定项目不同而有不同要求： ;指测定条件稍有变动时，结果不受影响的承受程度，为常规检验提供依据。是衡量实验室和工作人员之间在正常情况下实验结果重现性的尺度。 分析方法重现性的测定是通过在不同的实验室内不同的实验者对同一样品的分别测试而获得的。(获得的这种再与正常检定下的精密度进行比较,从而确定该法的耐用性,或称粗放度).;(1)鉴别试验除专属性、耐用性外，其它都不要求. (2)杂质的限量检查除专属性、检测限、耐用性外,其它都不要求。 (3)杂质的含量测定除检测限外，其它都要求。 (4)含量测定及溶出量测定除检测限、定量限外，其它都要求。;0.2;0.2