PCR技术的发展及应用.pptVIP

第五节 PCR技术的扩展和应用; 多重PCR(multiplex PCR) 1.原理 在一个PCR反应体系中加入多对特异性引物,针对多个DNA模板或同一模板的不同区域扩增多个目的片段的PCR技术。这一概念由Chamberian等于1988年提出。 优点：多重PCR同时扩增多个目的基因,可节省时间、降低成本、提高效率,特别是节省珍贵的实验样品。 ;2. 应用 2.1 医学研究与应用 如病原微生物的检测与鉴别，可同时进行多种病原微生物的鉴定。 2.2 植物学研究 在植物分子育种、基因表达研究、种质纯度鉴定、病虫害检测等方面,多重PCR 也得到重视。 ; 2.3 海洋生物学研究 海洋浮游生物数量庞大，种类繁多，而且幼体时期外形相似。研究发现，不同种类浮游生物细胞色素氧化酶I 的DNA差异明显，据此，研究者可通过设计特异性引物，采用多重PCR 方法进行分类鉴定。 ;3.多重PCR的技术要素 一个理想的多重PCR 反应体系，并非单一PCR 的简单混合，需要针对目标产物，进行全面分析、反复试验，建立适宜的反应体系和反应条件。多重PCR 的技术要素主要包括目的片段选择、引物设计、复性温度和时间、延伸温度和时间、各反应成分的用量等。多重PCR 的目标是多个目的片段的扩增，因此目的片段的选择是核心。;目的片段必须具有高度特异性， 各个目的片段之间需具有明显的长度差异，以利于鉴别。 各个引物必须高度