10免疫标记技术,1节酶免疫技术.pptVIP

;第十六章 酶免疫技术 ;;目　录 ;前 言;;第一节 酶标志物的制备 ;1.辣根过氧化物酶（HRP） ;HRP的底物 ;OPD反应后显橙黄色，加酸终止反应后呈棕黄色，测定波长492nm。不稳定，致癌性。;2.碱性磷酸酶 ;二、制备酶标记抗体(抗原）的方法;三、酶标记物的纯化与鉴定;四、固相载体 ;（二）固相载体的种类;第二节 酶联免疫吸附试验;二、ELISA的方法类型;;如果血清标本中含有类风湿因子（RF），则可出现假阳性反应。因为类风湿因子是一种抗变性IgG的自身抗体，它可同时与固相抗体和酶标抗体的Fc段发生结合，导致假阳性的出现。 ;（二）双位点一步法; E;如果待检标本中抗原浓度过高， 容易形成“钩状效应（hook effect）”。钩状效应严重时，可出现假阴性结果，必要时可将待检标本适当稀释后重新测定。;（三）间接法; ;此法由于受血清中高浓度非特异性IgG的干扰，通常要将待测标本进行一定稀释后才能测定。;（四）竞争法;待测抗原和酶标抗原竞争与固相抗体结合，因此结合于固相的酶标抗原量与待测抗原的量呈反比，待测抗原越多，其结合特异性抗体越多，而酶标抗原与特异性抗体结合就减少，底物显色反应浅；显色越深，待测抗原量则越少。 ;;竞争法主要用于检测小分子抗原，因小分子抗原只有一个抗原决定簇 。; 竞争法检测抗体;1.竞争法检测HBcAb： 先将HBcAg包被在