实验1_大肠杆菌的培养与分离.pptVIP

实验1 大肠杆菌的培养与分离;细菌的革兰氏染色 (P23);细菌的外形与大小;二、培养基 ;2.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方;单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。 菌落是鉴定菌种的重要依据。;液体培养基：;☆ 无菌技术;（１）消毒定义：;高压蒸汽灭菌 灼烧灭菌 干热灭菌;1、灼烧灭菌;1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？;实验用具;;二、大肠杆菌的培养和分离实验操作; （二）倒平板;倒平板技术;注意事项： 1.培养基灭菌后，需要冷却到60 ℃左右时，才能用来倒平板 2.灭菌及消毒：无菌操作台用超净紫外灯和过滤风灭菌；桌面及人手用酒精棉球消毒 3.操作时右手无名指和小指夹住封口膜,另外三指持三角瓶,左手拿培养皿并打开上盖的一边,在酒精灯火焰旁操作. 4.需要使锥形瓶的瓶口通过火焰，灼烧灭菌 5.平板冷凝后，要将平板倒置, 可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染；若培养皿中已形成菌落，很难再形成单菌落，达不到分离目的。; 1.培养基灭菌后，需要冷却到60 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？;2.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？; （三）大肠杆菌的扩大培养;（四）大肠杆菌的分离;一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的； 二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。;（四）大肠杆菌的划线分离;;问题讨论; 2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？;分离后,一个菌体便会形成一个菌落,这是消除污染杂菌的通用方法,也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一;2、涂布分离法:是指将培养的菌液稀释一定的倍数,然后取一定量稀释液加在固体培养基上,用玻璃刮刀涂布在培养基平面上.;划线分离法和涂布分离法哪个更好呢？;（五）大肠杆菌分离后保存;1.在培养后如何判断是否有杂菌污染?;2.实验完成后,接种过细菌的器皿应如何处理?;3.如果分离的是转基因的大肠杆菌,如何保证不被普通的大肠杆菌所污染?; （一）培养基的制作是否合格 将未接种（空白）的培养基放在恒温箱中保温1～2 d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。 （二）接种操作是否符合无菌要求 如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。 ;例1．下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是 A.防止杂菌污染 B.消灭杂菌 C.培养基和发酵设备都必须灭菌 D.灭菌必须在接种前;Ⅱ：回答有关“大肠杆菌的培养和分离”的问题： （1）大肠杆菌的扩大培养需要用LB培养基50ml，其配方为：蛋白胨0.5g、酵母提取物0.25g、氯化钠0.5g、水50ml。培养基中加入一定量的氯化钠，目的是 。 （2）在制备培养基时，有时还需要调节酸碱度，这一步骤应该在灭菌 。（填“前”或“后”） （3）用划线法在LB固体培养基上分离大肠杆菌，当接种完成后，盖好培养皿盖，将培养皿 ，放在37℃恒温箱中12~14h，当看到划线末端出现 时，表明细菌已被分离。 （4）如果分离的是转基因的大肠杆菌，如何保证不被普通的大肠杆菌所污染？ ;例、（1）在细菌的培养分离过程中涉及多个温度指标，请把下列操作过程和它对应的温度指标用选在每个灭菌过程后面。 A.121℃ B.50~60℃ C.35~37℃ D.25~28℃ E.140℃ 用烘干机干热灭菌2~3h 。 恒温培养细菌18~24h 。 恒温培养真菌18~24h 。 溶解或灭菌后的培养基倒平板时的温度 。 高压蒸汽灭菌 。 ;（2）在细菌培养的灭菌环节中，对待不同的设备装置用不同的灭菌方法。请在各对象后面选上灭菌方法。 A.酒精擦拭 B.火焰灼烧 C.高压蒸汽灭菌 D.G6玻璃砂漏斗过滤 手 。 接种环 。 含NaHCO3的培养基