实验二十二 胡萝卜素的柱层析分离.docVIP

实验二十二 胡萝卜素的柱层析分离 【目的】 1、掌握层析法的基本原理 2、了解柱层析分离法在生物化学中的应用 【原理】 胡萝卜素存在于辣椒和胡萝卜等植物中，因其在动物体内变成维生素A故又称维生素A原，胡萝卜素可用酒精、石油醚和丙酮等有机溶剂从食物中提取出来，且能被氧化铝(A12O3)所吸附。由于胡萝卜素与其他植物色素的化学结构不同，它们被氧化铝吸附的强度以及在有机溶剂中的溶解度都不相同，故将提取液用氧化铝（固定相）吸附，再用石油醚（流动相）等冲洗层析柱，即可分离成不同的色带。同溶质的其它色素比较，胡萝卜素吸附最差，跑在最前面，故也最先被洗脱下去，且可分成两种胡萝卜素（α-胡萝卜素、β-胡萝卜素） 【器材】 研钵、分液漏斗、层析管等。 【试剂】 1、95%乙醇 2、石油醚 3、1%丙酮-石油醚 4、氧化铝（Al2O3） 5、无水硫酸钠 【操作】 1、提取 取烘干的红辣椒皮3~4个，剪碎后放入研钵中，加95%乙醇4ml，研磨至提取液成深红色，在加石油醚6ml研磨3~5分钟，研磨中可酌情再加石油醚10ml左右。用纱布将提取液直接滤入分液漏斗中，用30ml蒸馏水洗涤三次，直至水层透明为止（为除去提取液中的乙醇）。将红色的石油醚倒入干燥的试管中，加入少量无水硫酸钠