实验二显微镜构造原理和使用方法.pptVIP

实验二 普通光学显微镜的构造原理及使用方法几种特殊显微镜的构造原理及使用方法细胞形态结构与几种细胞器的观察;实验目的;实验原理;目镜;几种特殊显微镜的使用 ;一、相差显微镜;相差显微镜将相位差转变振幅差，是利用了光的衍射和干涉现象。 光源射出的光线通过被检物体时，如果是完全均质透明的物体，光线将继续沿直线前进，称为直射光；如果是含有折射率略有不同的物体，一部分仍为相位和振幅相同的直射光，另一部分由于光的衍射现象则向周围侧方分散前进，这种光称为衍射光。衍射光速度比衍射光大约低1/4波长。当直射光和衍射光同时到达一点时，两者相互干涉，形成合成波。合成波的大小取决于两个光波的振幅和相差。如果振幅相等，相差为零，即波峰与波峰相遇，其合成波则有两倍的振幅，产生的相长干涉（同向量），最为明亮。若一个光的相位推迟，其合成波减小，光度渐暗，当恰好推迟半个波长（1/2）时，即波峰与波谷相遇，则两个光波的振幅相互抵消，合成波发生相消干涉（异向量），则成为黑暗状态。 在普通光学显微镜中，尽管光波通过被检物体后也发生了衍射，直射光与衍射光也发生了干涉而形成合成波，但因衍射的速度比直射光大约低1/4（而不是1/2或0）波长，所以合成波的振幅与直射光的振幅相同，即被检物体与背景间不能形成明暗反差，我们很难看到被检物体。;;下面介绍相差显微镜的构造： 1. 环状光阑： 由大小不同的环状孔组成的光阑，与聚光器一起组成转盘聚光器。外面标有10x，20x，40x，100x字样，相应地与不同倍率的物镜配合使用。环状光阑的作用是将直射光所成的像与衍射光旁像分开。 2. 相板： 安装在相差物镜后焦面上。相板分为两部分，即通过直射光的共轭面和通过衍射的补面。相板上镀有吸收膜和相位膜，以推迟直射光（衍射光的相位）并吸收直射光（或衍射光），从而使亮度发生变化。 相板的种类很多，相差物镜种类的也很多。 3. 合轴调中望远镜： 用以调整环状光阑所造成的像与相板共轭面完全吻合。相差显微镜在使用时，聚光镜下面的环状光阑的光环，应与相差物镜中的相位相互吻合，完全一致，否则，直射光和衍射光的光路紊乱，应被吸收的光不能被吸收，相位该推迟的光波不能被推迟，失去相差显微镜的作用。由于环状光阑的光环与物镜相板的环孔甚小，为使二者相互对准，完全重合，必须使用合轴调中望远镜。;实验步骤;;二、荧光显微镜;下面介绍荧光显微镜的构造： 1. 荧光光源：一般用超高压汞灯，它的紫外和紫兰部分有很强的发射。 2. 滤色系统：由激发滤光片和吸收滤光片组成。 3. 激发滤光片：提供一定波长的激发光。激发光的波长根据备激发的荧光物质而定。 4. 吸收滤光片：把不需要的激发光吸收掉而只让所需要的荧光通过，同时也保护眼睛不受激发光的影响。吸收滤光片必须与激发滤光片配合使用。;实验步骤;三、暗视野显微镜;;1. 安装暗视野聚光器，并选用强光源。 2. 在聚光器和载玻片之间滴加香柏油，目的是防止照明光线于聚光镜上面进行全反射，达不到被检物体，从而得不到暗视野照明。 3. 调节聚光器的焦点对准被检物。首先调节聚光器的中心，使聚光器的光轴与显微镜的光轴严格地在一条线上，然后操纵聚光器调节螺旋，使其升降，把焦点对准被检物体，以圆锥形光束顶点照射物体。 4. 示范观察：示范观察变形虫装片及叶片栅栏细胞装片。暗视野显微镜在下观察活的动植物细胞，看不清内部的细微结构，只能观察到细胞，细胞器的轮功廓。尤如黑夜里看星星，在黑暗的背景里看到细胞所反射或衍射的光线形成的像。变形虫细胞内细胞质的流动及栅栏细胞内原生质的流动均可看到。;实验步骤;作业;;