小型化免疫偶联物FabADM抗肿瘤机制的初步探讨.docVIP

KKME---专业医学搜索引擎/ 小型化免疫偶联物Fab-ADM抗肿瘤机制的初步探讨 　　李　灵1 ，黄风迎1 ，黄幼生2 ，郭峻莉1 ，黄用豪1 ，王 　华1 作者单位：(海南医学院1.海南省热带病重点实验室，2.病理学教研室，海南 海口　571101) 　　【摘要】 目的： 探讨小型化的免疫偶联物Fab-ADM的抗肿瘤机制。方法： 建立小鼠肝癌细胞H22及小鼠黑色素瘤细胞B16的皮下移植瘤模型，分别予以生理盐水及ADM、Fab-ADM治疗，治疗结束后取肿瘤组织制备石蜡切片进行HE染色，并通过CD34进行免疫组织化学染色以计数肿瘤微血管。结果： 在2种动物模型中，Fab-ADM治疗组小鼠瘤体内可见肿瘤细胞的大片状坏死，微血管密度明显减少，与生理盐水对照组及ADM治疗组相比差异有统计学意义(P0.05)。结论：Fab-ADM偶联物较游离ADM具有更强的肿瘤抑制作用，其可显著抑制肿瘤微血管密度的增加，继而引起肿瘤细胞的大面积坏死。 　　【关键词】 Fab-ADM偶联物 ;微血管密度; 抗肿瘤机制 　　[ABSTRACT] Objective： To investigate the anti-tumor mechanism of dowmsized immunoconjugate Fab-ADM. Methods： Preparing hepatocarcinoma H22 and melanoma B16 tumor-bearing mice and separated them into three groups， treated with normal saline， adriamycin and immunoconjugate Fab-ADM， respectively. SP immunohistochemistry method was used to detect the expression of CD34. Results： For two mice tumor models， the tumor cells appeared large area necrosis in Fab-ADM treated group， and microvessel density also decreased significantly(P0.05) compared with the normal saline and adriamycin treated groups. Conclusion： Treatment with Fab-ADM supressed increasing of tumor microvessel density significantly， and then causeed large area necrosis， which may be the mechanism of Fab-ADM treatment effection. 　　[KEY WORDS] Immunoconjugate Fab-ADM;MVD;Anti-tumor mechanism 　　Endoglin是转化生长因子Β1(transforming growth factor-Β1， TGF-Β1)和细胞表面受体结合的辅助分子[1,2]，和肿瘤血管生成密切相关。Endoglin选择性高表达于肿瘤新生血管的内皮细胞，是肿瘤血管生成的标志性分子。阿霉素(adriamycin，ADM)属周期非特异性药物，对各种生长周期的肿瘤细胞都有杀灭作用，是一种广谱的抗肿瘤抗生素。本课题组以Endoglin为靶点，将小型化抗Endoglin单抗(抗体小型化，即通过酶切方法获得单抗Fab片段，其分子质量约相当于完整抗体的1/3)与阿霉素偶联。前期的小鼠体内实验已初步证明偶联物Fab-ADM较ADM有较强的抗肿瘤作用。为进一步探明所得偶联物的抗肿瘤作用机理，本研究利用CD34标记肿瘤组织标本中的微血管，比较偶联物与游离阿霉素对肿瘤微血管密度的影响，初步阐释偶联物的肿瘤抑制机制。 　　1　材料与方法 　　1.1 　材料 　　1.1.1 　细胞株及实验动物 　　小鼠肝癌细胞株H22及小鼠黑色素瘤细胞株B16购自中国典型培养物保藏中心;清洁Ⅱ级雄性昆明种及雄性C57BL/6小鼠，体重18～22 g，由广东省医学实验动物中心提供。 　　1.1.2 　试剂 　　盐酸阿霉素为意大利Pfizer Italia S.r.l.公司产品，Fab-ADM偶联物为本实验室制备，细胞培养用RPMI 1640培养基及FBS购自Gibco公司，兔源抗CD34单抗及石蜡切片的免疫组化相关试剂盒均购