5RACE Takara.pdf

Code No. 6107 研究用 5-Full RACE Kit with TAP 说明书 v201211Da 目 录 内 容 页 码 ● 制品说明 1 ● 制品内容 1 ● 保 存 2 ● 试剂盒原理 3 ● 特异性引物的设计要求 3 ● 试剂盒特点 4 ● RNA 样品制备 4 ● 试剂盒使用注意 4 ● 使用 Control HL60 Total RNA 时的 5′ RACE 实验例 5 ● 实验样品的 5′ RACE 操作方法 8 ● 实验例 12 ● QA 12 ● 制品说明 本试剂盒是高灵敏度、高特异性扩增 cDNA 5′ 末端全长的试剂盒。使用 RT-PCR 方法扩增目的 DNA 时， 一般很难得到全长的 cDNA 片段，在基因工程研究中，分析遗传基因的全长 cDNA 序列十分重要。RACE （Rapid Amplification of cDNA Ends）法能有效解决这一问题。5′ -Full RACE Kit with TAP 能够通过已 知的 cDNA 序列，高灵敏度、高特异性地扩增 cDNA 的 5′ 末端的全长序列。 本试剂盒应用了“去帽法”原理，Tobacco Acid Pyrophosphatase（TAP）可以去掉 mRNA 的 5′ 帽子结构， 使用 T4 RNA Ligase 将 5′ RACE Adaptor 连接到 mRNA 的 5′ 端后，可以使用 5′ RACE Adaptor 上的引 物与已知序列部分的引物进行 RT-PCR 反应，高特异性地扩增 cDNA 5′ 末端的全长序列。 本试剂盒中含有完成 5′ RACE 操作的主要试剂。试剂盒中使用的 Reverse Transcriptase M-MLV（RNase H-）经过了本公司的特殊改良，反转录性能良好，无 RNase H 活性，