卫生化学——紫外可见分光光度法.ppt

*;*紫外-可见分光光度法（ult;*如原子吸收分光光度法如原子发;*紫外－可见分光光度法是根据物;*待测物质;*第一节　概述一、电磁辐射和电;*光的传播速度：c－真空中光速;*光量子，具有能量：h－普朗克;*结论:一定波长的光具有一定的;高能辐射区 γ射线 ;*;*第二节 基本原理1.紫外-可;*物质分子内部三种运动状态对应;*电子基态电子激发态J3J2J;*物质对不同波长的光线具有不同;有色物质的不同颜色是由于吸收了;*2.分子吸收光谱及其特征将不;*吸收光谱特征：定性依据 ;*;*（一）有机化合物的电子跃迁类;*按能量大小：σ→ σ* ;*1. σ→σ* 跃迁．饱和烃;*２．n→σ* 跃迁 含有;*３．π→π* 此;*４．n→π* 易发生在含有杂;*1．电荷迁移跃迁（亦称内 o;*2．配位场跃迁　　四、五周期;*;1．生色团（发色团）：能吸收紫;2．助色团：本身无紫外吸收，但;5．红移和蓝移： 由于;*三、光的吸收定律（一）Lam;*我们把：　　It／ I0 ;*朗伯定律 (1760年) :;*朗伯-比尔定律式中：A：吸光;*值得注意的是：透过率T与c或;*应明确定律的三个应用条件：1;*吸光系数（Absorptiv;*摩尔吸光系数ε 物理意义： ;在最大吸收波长λmax处，常以;*（二）偏离Beer定律的因素;*1.光学因素 1）非单色光的;*2）杂散光的影响： 杂散光是;*2. 溶液的物理及化学因素的;*２）体系（介质）不均匀的影响;*第三节　紫外-可见分光光度计;*白炽光源：如钨丝灯、碘钨灯(;*;*２．单色器作用：将光源辐射的;*3）色散元件常用的色散元件有;*光栅在镀铝的玻璃表面刻有数量;*3．吸收池又名: 比色皿，用;*4．检测器作用：是检测通过溶;*２）光电倍增管（photom;*二、分光光度计的类型;*１．单波长单光束分光光度计;*特点：结构简单、价格低廉使用;*2．单波长双光束分光光度计;*;*特点：不用拉动吸收池，可以减;*３．双波长分光光度计;*特点：利用吸光度差值定量消除;*三种分光光度计的区别;第四节 分析条件的选择一;*2.考虑溶剂的极性溶剂的极性;*二、显色反应条件的选择（一）;*２．显色反应的要求灵敏度高，;*（二）显色反应条件的选择　１;*２.溶液的酸度1）酸度对显色;*(3)酸度对金属离子存在状态;*3．显色温度当温度升???： ;*A4．显色时间显色反应可能：;５.干扰的消除（样品成份较复杂;*二、测量条件的选择（一）测量;*（二）吸光度读数范围的选择光;*由于T 与浓度c 不是线性关;*在用分光光度计进行比色测定时;*（三）参比溶液(refere;*２）试剂参比：　　如果除待测;*４）平行操作空白：在测量波长;*第五节　　定性与定量分析一、;*3.定性鉴别的方法：对比法1;*2）对比吸收光谱的特征值;*二、定量分析及应用示例（一）;*例：芦丁含量测定标液：分别移;*２．直接比较法（对照法，外标;练习例：维生素B12 的水溶液;练习例：精密称取B12样品25;练习例：解：;练习解：2．精密称取0.050;*３．双波长分光光度法（等吸收;双波长法的优点：１）免了参比液;优点：１）使显色剂溶解度增加２