09生物学术活动蓖麻毒蛋提取白实验报告.doc

学术活动实验报告 题 目： 蓖麻毒蛋白的分离纯化及其应用 目 录 摘 要……………………………………………………………… 1 一：实验目的………………………………………………………… 1 二：实验原理………………………………………………………… 1 2.1什么是蓖麻及蓖麻毒蛋白…………………………………… 1 2.2分离与提纯…………………………………………………… 2 2.3检测…………………………………………………………… 4 三：实验内容………………………………………………………… 4 3.1 实验器材……………………………………………………… 4 3.2 实验步骤……………………………………………………… 4 四：实验结果分析…………………………………………………… 5 五：实验心得体会…………………………………………………… 6  PAGE \* MERGEFORMAT 7 摘 要：蓖麻是一种适应性很强的油料植物,具有较高的经济价值与广泛的应用前景。本次实验经(NH4)2SO4沉淀,分子筛层析和亲和层析等处理,从去壳蓖麻籽中分离纯化得到蓖麻毒蛋白, 通过考马斯亮蓝染色法-紫外分光光度法检测蓖麻毒蛋白的含量，用实验室的紫外可见分光光度计进行检测。最后参照标准蛋白测定数值绘制标准曲线 然后根据标准曲线得到所提取蛋白样品的相对浓度。 关键词：蓖麻毒蛋白 层析 分离 纯化 分光光度计 浓度 实验目的 1.学习了解蓖麻及蓖麻毒蛋白的性质与作用。 2.了解并且掌握蓖麻毒蛋白的分离纯化的方法。 3.掌握考马斯亮蓝染色法-紫外分光光度法检测蓖麻毒蛋白的含量的实验方法。 4.学习对生化实验的中出现问题的分析解决方法。 实验原理 2.1什么是蓖麻及蓖麻毒蛋白 蓖麻，又称大麻子布于非洲、亚洲等，具有特殊的用途和很高、红麻等，是大戟科蓖麻属植物，蓖麻栽培历史悠久，是世界十大油料作物之一，主要成分的经济价值蓖麻的种子（蓖麻子）蓖麻籽是蓖麻成熟的果实，含有45%左右的油，其油可作为重要的化工原料，生产润滑油、油漆、表面活性剂等。榨油后可剩余50%的蓖麻饼粕，??粕脱脂后含35%左右的蛋白质，但因其废弃物中含5 %的剧毒蓖麻毒蛋白，使大量蛋白质无法利用。蓖麻的利用价值非常高，蓖麻籽可以榨油；蓖麻叶可以养蚕；蓖麻茎秆可以制板和造纸；蓖麻的根、茎、叶、籽均可入药；现代医学研究表明蓖麻毒素是重要的抗癌物质；蓖麻粕营养丰富，是优质有机肥，脱毒后是一种高蛋白饲料。蓖麻籽含油量50%左右，是其它油料作物所不能及的。其籽油含90%左右的羟基脂肪酸，独特的分子结构决定了蓖麻是一种重要的工业油料作物，被称为“绿色可再生石油资源”，是替代石油生产化工原料最理想的植物油脂。 蓖麻毒蛋白，是从蓖麻中分离得到的具有凝集素活性的毒蛋白，为最强烈天然毒素之一。是由全毒素、毒类素、凝集素三种物质组成的蛋白质。蓖麻毒蛋白对所有哺乳动物真核细胞都有毒害作用，而对某些恶性肿瘤细胞毒性更强。这使它在医学上成为用于杀伤肿瘤细胞的首选毒素之一。蓖麻毒蛋白是糖蛋白异二聚体，是由全毒素、毒类素、凝集素三种物质组成的蛋白质，并由数种不同类型的高分子蛋白质组成，蓖麻毒蛋白的氨基酸组成（质量百分比）如下：赖氨酸-1.5%，撷氨酸-2.9%，HYPERLINK /view/513071.htm甘氨酸-2.0%，异亮氨酸-3.6%，组氨酸-0.9%，HYPERLINK /view/238650.htm色氨酸-0.8%，亮氨酸-3.8%，HYPERLINK /view/418479.htm苯丙氨酸-2.3%，苏氨酸-2.%，肤氨酸-1.6%，天冬氨酸-10.3%，蛋氨酸-0.9%，HYPERLINK /view/20188.htm谷氨酸-6.8%，HYPERLINK /view/29882.htm精氨酸-12.7%，HYPERLINK /view/1073139.htm丝氨酸-8.2%。由此可见蓖麻毒蛋白中精氨酸、天冬氨酸、丝氨酸和谷氨酸的含量较多。而A链色氨酸200、精氨酸180、谷氨酸177、酪氨酸123和酪氨酸80在氨基酸序列中是几个保守的非极性氨基酸，它们对稳定活性中心起了一定的作用。由于A链的赖氨酸的含量低，所以可防止泛素化和泛素介导的蛋白酶水解，有研究证明赖氨酸被移除不会影响A链的活性、结构、稳定性，如果在上面附加4个赖氨酸残基，A链的降解速度会明显加快。 2.2分离与提纯 从蓖麻种子或蓖麻饼粕中提取蓖麻毒蛋白粗提液的方法主要有：乙酸溶液提取法；磷酸缓冲溶液提取法；硫酸铵沉淀法和透析法等。 2.2.1 乙酸提取法 称取适量蓖麻饼在研钵中研碎（研碎置于冰浴中，防止蓖麻毒蛋白