体外放射剖析的技术.pptVIP

第六章 体外放射分析技术In vitro radioassay;体外分析发展史;Yalow ;一、定义 以放射性核素或其他非放射性物质标记的配体(Ligand)为示踪剂，以配体和结合体的结合反应为基础，在试管内进行的微量生物活性物质的检测技术。;二、分类:; 放射免疫分析 radioimmunoassay, RIA;一、RIA的基本原理 （一）竞争抑制结合反应： 放射免疫分析是在体外条件下，由足量的非标记抗原（Ag）与定量的标记抗原（*Ag）对限量的特异性抗体（Ab）的竞争抑制结合反应。 ;分析原理;Ag*与Ag由于免疫化学性质一致，共同竞争性与Ab结合，当Ag*和Ab的量保持恒定，Ag*与Ag之和大于Ab时，则Ag*-Ab复合物的形成受Ag含量的制约，二者之间存在竟争抑制的函数关系，即随着Ag浓度的增加，Ag*-Ab复合物就减少，因为Ag*对Ab的结合被Ag竞争性抑制。根据这一函数关系的标准曲线，可求出被测抗原的含量 ;（二）剂量反应曲线：标准曲线 标记物与被测物之间的函数关系可以用剂量反应曲线来表示。剂量反应曲线是用一系列标准抗原反应而绘制出来的，所以又叫标准曲线。 标准抗原(标准品)是厂家在试剂盒中提供的已知剂量的非标记抗原。 ;标准曲线的绘制方法 用一系列已知浓度的标准抗原和一定量的标记抗原在一定条件下同限量的特异性抗体进行反应； 在反应达到平衡后，利用适当的分离方法分离B和F； 分别测量B和F的放射性； 用反应变量（如B/F）作为纵坐标，反应剂量作为横坐标（即一系列标准抗原）作一条曲线，就得到不同浓度的标准抗原对反应变量的竞争抑制曲线，这就是剂量反应曲线。 ;标 准 曲 线;二、RIA的基本步骤：;三、质量控制(Quality Control):;主要优点：;Thank You !;非竞争性放射免疫分析(免疫放射分析 IRMA);IRMA与RIA的主要区别：;IRMA主要优点：;;;电化学发光（ECL）：  ECL是继放射免疫、酶免疫、荧光免疫、化学发光免疫之后的新一代标记免疫测定技术 ECL是一种在电极表面由电化学引发的化学反应，实际上包括了电、化学发光两个过程，故是化学发光的一种发展，电化学反应在电极表面周而复始的进行，光信号明显增强，因而ECL与CL的差异??于：;二.时间分辨荧光免疫（time-resolved fluorescence immunossay —TRFIA）;原理： TRFIA的标记物由镧系元素螯合物与Ab或Ag组成。待测物通过免疫反应形成的复合物上，标有镧系元素（ Eu3+），经紫外线激发后会发出荧光。但连接在复合物上的Eu发射的荧光很弱，需要将其游离出来再形成一个能发射强荧光的络合物。因此在免疫反应结束后，需向体系中加入一种“荧光增强剂”，大大增加信号，所以该技术有时也称为解离增强镧系荧光免疫分析（DELFIA）。 所谓时间分辨是指Eu3+受激活后产生寿命较长的荧光，而一般干扰荧光寿命较短，固可用仪器把测量时间定在每次激发后的数百?s之后才开始，干扰荧光已衰减到很低水平，所取荧光信号是荧光衰减过程的中间一段。;