中华蜜蜂三型蜂上颚腺组织形态比较及胚后发育.pdf

中华蜜蜂三型蜂上颚腺组织形态比较及胚 后发育 上颚腺( mandibular gland) 是昆虫重要的外分泌腺, 位于昆虫头内两侧,为一对囊状腺体,与上颚相连,开口于上 颚基部 ( Snodgrass,1956; Cruz-Landim and Mello,1967) , 一般分为分泌部和储存囊 2 部分 ( Vallet et al.,1991; Lensky and Cassier,1995) 。上颚腺的分泌活动以及腺体 功能同蜜蜂的蜂型以及年龄有关 ( Gracioli-Vitti and Abdalla,2006) ,其产生的化学物质在昆虫的种内信息交流 中起重要作用。 关于蜜蜂科上颚腺的结构、发育以及功能,国内外学者 进行过许多研究。杜兰芝和张晓萍( 1990)对中华蜜蜂 Apis cerana cerana 上颚腺超微结构的比较研究表明,成年工蜂 的上颚腺呈囊状,胞内管和胞外管的管壁由 3 层结构组成, 上颚腺细胞的超微结构与咽下腺类似。无刺蜂 Melipona bicolor bicolor 不同蜂型的上颚腺在大小和功能上都有差 异: 蜂王的上颚腺最发达,能产生大量的“蜂王物质”,在蜂 群中起信息素的作用; 工蜂其次; 而雄蜂的上颚腺最不发 达,退化成小囊 ( Gracioli-Vitti and Silva deMoraes,2002) 。麦蜂 Scaptotrigona postica 工蜂和雄 蜂的上颚腺在组织结构上没有明显差异,但是腺体细胞的超 微结构在不同性别和年龄存在差异( Gracioli-Vitti and Abdalla,2006) 。麦蜂 Meliponaquadrifasciata anthidioides 的上颚腺是由上颚内陷形成的,在预蛹早期 就已经开始分化( Cruz-Landim andMello,1967) 。此外,在 蜜蜂蜂群中,工蜂的行为不只受到产卵蜂王上颚腺分泌物的 影响,还受到不同年龄未受精蜂王的影响( Wossler et al.,2006) 。但是关于中华蜜蜂三型蜂上颚腺组织形态的比 较以及胚后发育状况未见报道。 本研究通过组织形态学、BrdU ( 5-bromo-2-deoxyuridine) 免疫组织化学 ( BrdU incorporation) 技术,对中华蜜蜂 A. c. cerana 不同蜂型 上颚腺的组织结构以及工蜂上颚腺胚后发育的过程进行了 比较研究,为昆虫上颚腺的结构和功能研究以及昆虫社会行 为的研究提供一定的理论依据。 1、 材料与方法 1. 1 供试材料 实验所用的中华蜜蜂蛹及成虫均购自秦岭大峪中华蜜 蜂养殖基地,所取材料来自同一蜂群,包括: 1 -2 日龄预蛹 ( PP1 -PP2) ;1 -9 日龄蛹( P1 - P9) ; 成虫包括采集工 蜂,处女蜂王和产卵蜂王,以及未交配雄蜂。 1. 2 苏木精-伊红染色( hematoxylin-eosin staining,HE 染色) 组织化学方法 中华蜜蜂工蜂、蜂王、雄蜂的成虫各 3 ~5 头,取头部, 多聚甲醛 4℃固定过夜。梯度酒精脱水,二甲苯透明。石蜡 包埋,横向连续切片,切片厚度 5 ~ 7μm,切片裱于涂有多聚 赖氨酸的载玻片上,烘干备用。切片脱蜡后复水,HE 染 色,OLYMPUS( BX51)显微镜观察拍照。 1. 3 BrdU 免疫组织化学方法 1. 3. 1 BrdU 掺入处理: 取中华蜜蜂工蜂的预蛹、1- 9 d 蛹和成虫活体各 3 ~ 5 头,从头部触角基部注射约 3 μL 浓 度 为 25 mg/mL 的 BrdU ( B9002,Sigma) ,掺入时间为 8 h。 1. 3. 2 BrdU 免疫组织化学染色: 将 BrdU 处理过的 预蛹及蛹和成虫取头部,4% 多聚甲醛 4℃固定 8h。 70% ,80% ,90% ,95% 和 100% 梯度酒精脱水,石蜡包埋,横 向连续切片,厚度为 7 μm。切片裱于涂有多聚赖氨酸的载 玻片上,烘干备用。 切片用二甲苯脱蜡,入梯度酒精复水; 抗原修复,磷酸 盐缓冲液( phosphate buffered saline,PBS)洗 3 次; 3% 过氧化氢封闭内源性酶 10 min,Tris-HCl 缓冲液( Tris-HCl buffered saline,TB