植物体细胞无性系变异及其育种上的应用.docxVIP

PAGE \* MERGEFORMAT4 植物体细胞无性系变异及其育种上的应用 在Schleiden和Schwann的细胞学基础上，1902年德国Haberlandt提出植物细胞具有全能性（totipotent）的理论，直到二十世纪四十年代，组织培养得以建立。经众多科学家和学者的不断努力，植物组织培养技术得以完善，被应用于植物生产的众多领域。植物组织培养（plant tissue culture）是指植物的一个细胞、器官或组织，在无菌条件下，经人工培养，使其最终形成完整的新植株的过程。 虽然植物细胞、器官或组织具有分化成完整的植株的能力已广为人知，但是在未来的几十年里，这仍然被视为科学界的重大问题之一[1]。1980年，Shepard等[2]发现利用可无性繁殖的植物——马铃薯（Solanum tuberosum）栽培品种“Russet Burbank”的叶肉原生质体培养，可获得突变频率较高的突变体。随后，Larkin和Scowcroft[3]将这种现象命名为体细胞无性系变异（somaclonal variation）来描述植物细胞组织培养过程中的再生细胞存在的大量变异现象，为体细胞无性系的筛选和新变异来源做了铺垫。目前，对于体细胞无性系变异的研究已有很多，但仍有许多没有研究清楚的地方，有待后人在这一方面做出更多贡献，并大规模推广应用。 1.体细胞无性系变异的遗传基础 体细胞无性系变异是具有遗传基础的，具体表现在染色体变异、基因突变以及转座子激活等方面[4]。在水稻[5]、小麦[6]和大蒜[7]等植物愈伤组织培养过程中，均发现了染色体数目倍性变异的现象；组培大蒜愈伤组织[8]，再生黑麦根尖细胞[9]，均发现其中发生了不同类型的染色体结构变异。袁云香等[10]用含Ac/Ds转座元件的愈伤组织组培，结果6%的再生植株仅含Ac，而Ds因切离而丢失，表明组织培养可获得突变体。此外，组织培养还会造成植物DNA甲基化的变异，经组织培养的香蕉[11]和豌豆[12]等，研究表明其DNA甲基化水平上升；而在大豆[13]、大麦[14]和草莓[15]上发现，DNA甲基化水平降低。DNA甲基化水平的不同，可能与培养基的成分和激素的浓度、比例有关[16]。 2.体细胞无性系的影响因素 体细胞无性系变异产生的因素主要有由培养基成分、外植体的类型、基因型和培养时间等[17]。在对含不同附加物成分的培养基上的小麦愈伤组织染色体进行跟踪研究发现，6-BA、AgNO3、高浓度2,4-D，蔗糖均不同程度地诱发小麦愈伤组织的姐妹染色单体交换(SCE)；2,4-D可提高变异频率，而AgNO3则降低之，6-BA影响不明显，但高浓度的6-BA可加大长期培养愈伤组织的超倍性体细胞频率[18,19]。Das等[20]用菠萝“Mitsubishi”品系的顶芽、腋芽和果实不同外植体诱导出愈伤组织，经培养后以果实为外植体的所有再生植株均发生变异，顶芽的有7%发生变异，腋芽的变异率为34%；郑文静等[21]以成熟胚、幼胚、幼穗及花药为外植体进行水稻组织培养，结果以成熟胚为外植体时获得的后代材料有利变异率最高。王刚[22]组培兰州百合和野百合愈伤组织，发现两种百合的再生植株均发生变异，但染色体数目变异范围分别为9-50和12-50条。香蕉“Nanicao”品种的茎尖在第5、7、9和11次继代后，在诱导的再生植株中，体细胞变异频率分别为1.3%、1.3%、2.9%和3.8%[23-25]。 3.体细胞无性系变异的鉴定方法 早期体细胞无性系变异主要依靠人观察来判断。随着学科的发展，人们将分子标记技术应用于变异的分析。自1990年Williams等[26]首次报道RAPD（random amplifled polymoriphic DNA）技术，因其在鉴定体细胞无性系变异株具有快速、准确、可靠的优点而被广泛应用。RFLP（restriction fragment length polymorphisms）能有效的检测植物因DNA甲基化而引起的体细胞无性系变异[27,28]，但是对引物和酶的筛选也在一定程度上限制了该项技术的应用。AFLP（amplified fragment length polymorphism） 分子标记技术则结合了RFLP 和 RAPD 的优点，具有方便快速、信息量大和稳定性强等优点，已初步应用于多种植物体细胞无性系变异的分析和鉴定，并检测到相对较多的多态性信息[29-31]。SSR（simple sequence repeat）标记，可以准确快捷地鉴定离体培养下各材料的基因型，确定其遗传背景和来源[32]。 4.体细胞无性系变异在育种上的应用 目前，体细胞无性系变异的研究所涉及物种十分广泛，如小麦、水稻、燕麦、大麦和玉米等单子叶作物，马铃薯和油菜等双子叶作物[