常见的生化与分子生物学技术幻灯片.ppt

常见的生化与分子生物学技术;生物大分子的提取和纯化;;生物化学研究技术方法;生物大分子分离纯化的一般步骤和原则;要了解的生物大分子的物理、化学性质主要有： 在水和各种有机溶剂中的溶解性。 在不同温度、pH值和各种缓冲液中生物大分子 的稳定性。 固态时对温度、含水量和冻干时的稳定性。 各种物理性质：如分子的大小、穿膜的能力、带电的情况、在电场中的行为、离心沉降的表现、在各种凝胶、树脂等填料中的分配系数。 其他化学性质：如对各种蛋白酶、水解酶的稳定性和对各种化学试剂的稳定性。 对其他生物分子的特殊亲和力。 ;分离纯化的一般程序;生物大分子的浓缩; 超过滤法：把提取液装入过滤装置，在空气或氮气的压力下，使小分子物质通过半透膜，大分子物质留在膜内。 透析浓缩法 减压蒸馏浓缩法：将提取液装入减压蒸馏装置中，在减压真空状态下进行蒸馏。 冰冻干燥法 ;纯度鉴定;蛋白质、核酸的定性定量检测;核酸的纯度鉴定一般采用琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶电泳，沉降分析和紫外吸收法（A260/A280）等方法。 同蛋白质一样，核酸纯度鉴定也必须采用2-3种方法才能确定。;电泳基本原理;电泳;影响泳动度的因素： 1. 电场强度： 电场强度是指每厘米的电位降，也称电位梯度(电势梯度)。电场强度越高，则带电颗粒泳动越快。 2. 溶液pH 为使电泳时pH值恒定，必须采用缓冲液作为电极液，溶液的pH值决定带电颗粒