实验10 细胞融合.ppt

实验 10 细胞融合;二、实验原理;二、实验原理;三、实验材料、仪器和试剂;① 鸡血细胞悬液的制备 从家鸡的翼根静脉采血制备抗凝全血。加入4倍体积的阿氏血液保存液，制成红细胞储备液，保存于4℃。（已完成） 取鸡血细胞储备液1 ml，1200rpm离心5 min，弃去上清液。按红细胞压积，加入10倍体积的Hanks溶液轻轻悬浮细胞，制成10%鸡血细胞悬液，备用。（每组一管）;③ PEG诱导细胞融合 （每人一管） 取①中10％的鸡红细胞悬液1 ml放入离心管中，再加入5 ml的Hanks溶液混匀，1000rpm离心5 min，小心弃去上清，用指弹法将细胞团块弹散。 吸取1 ml 37℃温热的50%PEG溶液② ，在1分钟内，慢慢沿着离心管壁逐滴加入，边加边轻摇离心管，使PEG与细胞混匀，然后在37℃水浴中静置1-2 min。 ④ 终止PEG作用 （每人一管） 缓慢加入5 ml Hanks液，轻轻吹打混匀，于37℃水浴中静置5 min。 ;⑤ 细胞悬液的制备 用吸管轻轻吹打细胞团数次，使细胞团分散，1000rpm离心5 min，使细胞完全沉降。弃去上清液，加1 ml Hanks液，悬浮细胞团，混匀。;⑥ 计算细胞融合率 细胞融合率是指在显微镜的视野内，已发生融合的细胞其细胞核总数与该视野内所有细胞的细胞核总数之百分比。 视野内融合细胞的核数 融合率 = ×100％ 视野内细胞的总核数 ;五、注意事项;1. 绘制你所观察到的融合细胞。 2. 选取5个随机视野进行观察，计算融合率。 3. 请写出细胞融合基本原理及应用。