棉铃虫酯酶突变体的构建、表达及酶促动力学特性.pdfVIP

浙 江 大 学 学报 ?农业与生命科学版?? ???????????????????????????????????．?? ?????????．?? ???：／???．????????．???．???．??／???? ?????：???????????．???．??? ???：??．????／?．????．????—????．????．??．???? 棉 铃 虫酯 酶 突变 体 的构 建 、表达 及 酶促 动 力 学特 性? 李永 强?。，吴 美玲? ，马志 卿? ，冯俊 涛? ，张兴 。。。? ??西北农林科技大学无公害农药研究服务中心，陕西 杨凌 ??????；?．西北农林科技大学植物保护学院 ，陕西 杨凌 ???????? 摘 要? 在 前 期研 究 的 基 础 上 ，基 于 定点 突 变技 术 在 棉 铃 虫酯 酶 ????和 ???? 的 ????位 和 ????位 分 别人 工 构 建? 由 丙氨 酸 ???变为 天 冬 氨 酸 ???、苯 丙氨 酸 ???变 为 亮 氨 酸 ????的 单 、双 位 点 突 变体 ，利 用 杆 状 病 毒 载 体 表 达 系 统 对? 其进行异源真核表达 ，采用酶标仪 测定表 达产物对 ?一乙酸萘酯和 ?硝基 苯基 乙酸酯的酶促 动力学参数 ．结果表 明 ：? 酯 酶 ????位 突 变 降低 了酯 酶 的 酶促 水 解 活 性 ，其 对 底 物 的 亲和 力 明显 减 弱 ?反 应 常 数 ?? 值 变大 ?，速 率 常 数? ／? ?? 值 仅 为 突 变 前 的 ?／／??～ ?／??；????位 突 变 对 酯 酶 的 酶 促 水 解 作 用 影 响 相 对 ?? 小 ，其 ?? ／?? 值 为 突 变 前 的? ?／?～ ?／?；双位 点 突 变体 ??????／??????几 乎 全部 失 去 了对 底 物 的酶 促 水 解 活性 ，其 亲 和 力 明 显 下 降 ??? 值 升 高? 至 突 变前 的 ?～ ??倍 ?，? ?? 值 为 ?．??～ ?．??／????? ．?? ．??，仅 为 突 变前 的 ?／??～ ?／???．表 明 突 变对 酯 酶 活? 性有明显影响，????位 和 ????位氨 基酸残基是与酶催化功 能相 关的重要位 点，这将 为研 究酯酶在 棉铃 虫代谢抗? 性 中的 作 用提 供 一 定 的 参 考 ．? 关 键 词? 酯 酶 ；氨 基