西方蜜蜂一个新表皮蛋白基因的克隆和结构分析.pdfVIP

第 29卷第 6期 泉州师范学院学报 Vo1．29No．6 2011年 l1月 Journa1ofOuanzhouNormalUniversity Nov．2011 西方蜜蜂一个新表皮蛋白基因的克隆和结构分析 欧阳昊 ，葛清秀 ，孙亮先 ，梁勤 (1．福建农林大学 蜜蜂分子生物学实验室，福建 福州 350002； 2．泉州师范学院，分子生物学与药物化学重点实验室 ，福建 泉州 362000) 摘 要：利用西方蜜蜂雄蜂头部 5’LongSAGE文库中的一组标签序列，在蜜蜂基因组序列第 9号连锁群 上定位一个新的西方蜜蜂表皮蛋 白基因转录起始位点，并克隆了该基因的cDNA序列，继而利用此cDNA序列 分析了该基因的内含子和外显子结构．分析结果显示：该基因的DNA序列长 1253bp，含有4个外显子和3个 内含子，其cDNA长598bp，编码一个 169AA的富含 Val和 Pro残基 (23．67 ，2O．12 )多肽序列．BLAST 分析发现，该蛋白与已知的4个昆虫表皮蛋白序列的相似性为47．54 ，且其C末端有一个共有基序，说明这 5个蛋白可能属于同一个表皮蛋白家族．该研究结果提供了一个新的蜜蜂表皮蛋白基因，且该基因在雄蜂头部 表达水平较高． 关键词：西方蜜蜂；5’LongsLGE；表皮蛋白；转录起始位点；基序 中图分类号：Q966 文献标识码 ：A 文章编号：1009—8224(2011)06-0001—06 昆虫外表皮是由几丁质和多种蛋白质相互作用交联在一起形成的糖蛋白复合体，在昆虫机动特性[1]、抵 御水分蒸发和外界不 良环境的影响起着重要的作用．糖蛋白复合体是几丁质框架细丝嵌人多种蛋白质中形成 的，几丁质的不同无非是链的长短和乙酰化程度引起的，但是昆虫表皮蛋 白(InsectCuticularProteins，ICP)有 很大差异 ，几丁质影响着昆虫表皮的机动特性和其他生物功能，合理的蛋 白质组成对表皮结构也同等重要L2]． 昆虫表皮蛋 白与几丁质交联并形成复合体，所以分离纯化ICP很困难，而从核酸序列预测ICP则非常快捷．早 在 1982年Snyder等人就对果蝇的几个表皮蛋白基因的结构特性和进化进行了研究[3]，同年Snyder等报道在 CP3(CuticleProtein3)基因的预测启动子区域插入一个转座因子 (TransposableElement，TE)能够明显抑制 该基因的表达[4]．Snyder等研究了果蝇基因组中毗邻的两个表皮蛋 白基因表达情况，发现它们在不同发育阶 段呈不同表达规律L5]．近年来，黑腹果蝇 (Drosophilamelanogaster)[6]、西方蜜蜂 (Apismellifera)[7]和家蚕 (Bombyxmori)[8等昆虫的全基因测序工程完成后，He等人 9【]通过 LC-MS／MS技术分析了冈比亚疟蚊 (Anophelesgambiae)的表皮蛋白基因，发现根据基因组序列注释的ICP基因的9O 可在表皮 中检测到，从而 证实通过核苷酸序列分析表皮蛋白基因的策略是可靠的．然而 ，根据核酸序列预测 ICP是基于已知蛋白序列 特征，但是已报道的ICP蛋白序列数量有限，所以目前尚不能根据基因组序列鉴定其全部 ICP基因[2。。． 蜜蜂是重要的农业授粉昆虫，也是研究社会性行为的模式生物，西方蜜蜂的全基因组序列已于 2006年报 道[7]．在对蜜蜂全基因组进行功能基因注释时，研究人员发现只有一小部分的果蝇和按蚊表皮蛋白基因能够 在西方蜜蜂基因中预测到，说明西方蜜蜂可能拥有其特有的表皮蛋白．Kucharski等根据西方蜜蜂基因组序列 发现了3个串联排列的新的表皮蛋白基因apiderrnin1～3．这3个蛋白高度疏水 ，其氨基酸序列含 ICP中常见 的 A／V保守序列，但不含 RR保守结构域[1． 1995年，Velculescu发明SAGE(SerialAnalysisofGeneExpression)技术用于分析基因转录组mRNA丰 度L1引，随后Wei等人发明5’LongSAGE技术，可利用 CAP-Trapper原理获得带有 5’帽子的全长cDNA，并 且标签被检测到的次数可 以作为基 因表达丰度[1引．最近