土壤中分解尿素的細菌的分離与计数.pptVIP

课题2：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数;1、尿素;3、常见的分解尿素的微生物;基础知识; 培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。;1、显微镜直接计数：利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。; 不能区分死菌与活菌； 不适于对运动细菌的计数； 需要相对高的细菌浓度； 个体小的细菌在显微镜下难以观察；;2、间接计数法（活菌计数法） 常用方法：稀释涂布平板法。;计数法;比浊法;滤膜过滤法（以大肠杆菌为例） 方法：将已知体积的水过滤后，将滤膜放在伊红美蓝培养基上培养。 结果：在该培养基上计数出现黑色菌落的数目即计算出大肠杆菌的数量; 设置对照的目的：排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。 对照实验是指除了 被测试 的条件外，其他条件都 相同 的实验。满足该条件的称为 对照组，未满足该条件的称为 实验 组。;方案一：;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.; 从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。 取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。;制备选择培养基（尿素为唯一氮源）;◆应在火焰旁称取土壤10g。 ◆在稀释土壤溶液的过程中每一步都要在火焰旁进行。 ◆分离不同的微生物采用不同的稀释度。; 为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？;取0.1ml菌悬液;高浓度→低浓度，换枪头;涂布分离;在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。 选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。 ; 关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。 ;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.; 1.通过对照实验，若培养物有杂菌污染，菌落数偏高；若培养物混入其他氮源，则菌落形态多样，菌落数偏高，难以选择出分解尿素的微生物。 2.提示：选择每个平板上长有30-300个菌落的稀释倍计算每克样品的菌数最合适。同一稀释倍数的三个重复的菌落数不能相差悬殊，如相差较大，表示实验不精确。;课外延伸