小吞噬細胞實验幻灯片.pptVIP

小吞噬实验;掌握血液中的中性粒细胞体外吞噬异物能力的测定方法。 观察机体的非特异性免疫现象。;人外周血中性粒细胞吞噬功能检测（体外实验）。 小鼠腹腔中性粒细胞吞噬功能的检测（体内实验）。;一.人外周血中性粒细胞吞噬功能检测（体外实验）;来 源： 骨髓。 存在部位： 血液 、 炎症部位（全身）。 功能基础：溶酶体，过氧化物酶及杀菌物质。 功 能：具有吞噬细菌和清除溃残物质等防御功能。 反应时间及寿命：反应时间快,数分钟到几小时，寿命短.平均数小时。 ;菌液：表皮葡萄球菌菌液（9亿/ml） 抗凝剂：3.8%枸橼酸钠或肝素（25U/ml） 毛细吸管、凹玻片、载玻片、 牙签、甲醇、瑞特-吉姆萨染液、pH6.4PB、酒精棉球、采血针等。;1、取样;取一小滴上述混合液，置于载玻片上，用另一载玻片推成薄血片，自然干燥。 滴加甲醇固定5min，水洗。 置瑞特液1min，置pH6.4PB中3min，置吉姆萨液染5-10min。水洗，待干。;; 油镜观察下，中性粒细胞细胞质呈淡蓝色，细菌呈深蓝色，红细胞呈褐色，细胞核呈紫色。; 计数100个中性粒细胞，同时计数吞噬细菌的中性粒细胞数以及被吞噬的细菌总数，计算吞噬百分率或吞噬指数。 吞噬百分率= 吞噬指数=;人类白细胞的吞噬活性在37℃时最好，温度过高过低均会使其吞噬能力减低。 个体差异、年龄、健康状况的不同，其吞噬能力亦不同。 掌握好细菌与中性粒细胞的作用时间。中性粒细胞对细菌的吞噬是一个非常迅速的过程，吞噬5min时吞噬率达45%，10min时接近80%，20min 即达饱和。 取“细菌－全血”涂片时，要混匀后再取；制作血涂片要求推出尾部，过厚或过薄，均不利观察。 ;二.小鼠腹腔中性粒细胞吞噬功能检测（体外检测）;诱导：实验前一天给小白鼠腹腔注射无菌肉汤0.5-1.0ml，轻揉腹部。 实验前4-5h给小白鼠腹腔注射无菌肉汤0.5-1.0ml，轻揉腹部。 注射：实验时给小白鼠腹腔内注射表皮葡菌菌液0.5ml，轻揉腹部。 取样： 注射后35 -45min处死小白鼠，用毛细吸管抽取腹腔液滴片或直接涂片 染色：标本干燥后瑞氏染-吉姆萨染液染色。（染色同体外法） 镜检，观察中性粒细胞吞噬表皮葡萄球菌的现象。; 结果观察：油镜检查，先寻找白细胞，观察细胞质中有无被吞噬的细菌。 结果表示法同体外实验。;注射菌液时不要注射到皮下或腹腔脏器内，注射后轻揉腹部，使液体在腹腔内分散均匀 注意掌握好染色时间