07Rh（D）血型鉴定.docVIP

东莞常平医院 血库 文件编号： DGCPH-BK-SOP-07 Rh（D）血型鉴定版序：2005-1页码：第1 页，共2 页 [原理] 红细胞与抗D抗体发生凝集反应表明该细胞有D抗原，反之，无凝集现象表明试验的红细胞缺少正常强度的D抗原。 [试剂组成] 抗D试剂 广谱抗人球蛋白 [试剂保存和稳定性] 存放2—8℃，有效期内使用。 [标本收集和制备] 无菌操作收集血液标本,收集后尽可能立即进行实验。如果不能立即实验,应将样品贮存于2-8C。收集在ACD、CPD、CPD－2A液中的血液标本,不超过21天仍可进行实验，但是加EDTA、肝素和凝集的血液标本，实验应在2天内进行。 [操作步骤] 1盐水试管法 1.1 正常D抗原表型检测 1.1.1 取一只干净玻璃试管，加1滴抗D试剂。 1.1.2 加1滴3%—5%红细胞生理盐水悬液。 1.1.3 混匀后，200Xg离心1分钟或1000Xg离心20秒。 1.1.4 轻轻振荡，悬浮沉积细胞，肉眼观察凝集反应。 1.1.5 若观察无凝集反应，混匀后37℃水浴15分钟。 1.1.6 200Xg离心1分钟或1000Xg离心20秒。 1.1.7 轻轻振荡，悬浮沉积细胞，肉眼观察凝集反应。 若结果仍为阴性，需要时则从如下步骤进行弱D表型检测实验。 1.2 弱D表型抗原检测 1.2.1 操作步骤与上述盐水试管法相同。如果先前已进行了盐水试管法实验，同一试管可直接用弱D表型检测实验。 东莞常平医院 血库 文件编号： DGCPH-BK-SOP-01 Rh（D）血型鉴定版序：2005-1页码：第2 页，共2 页 1.2.2 混匀后，37℃水浴15分钟。 1.2.3 用干净的等渗盐水洗涤细胞至少4次，洗涤后充分将盐水弃掉。 1.2.4 加2体积广谱抗人球蛋白于细胞试管中。 1.2.5 轻轻混匀，500Xg低速离心15秒。 2 玻片法： 2．1 干净玻片上加1滴抗D。 2．2 再加入1滴全血（40%-50%HCT）。 2．3 用干净涂棒，将试剂和血液充分混匀。 2．4 在一个照亮的观察箱上方轻轻前后倾斜玻片，观察凝集反应。并在显微镜下镜检证实。 [结果判断] 阳性表明所测的红细胞带有D抗原。 阴性表明所测的红细胞缺少正常强度的D抗原，这种情况下，对于病人可以可靠地定型为Rh(D)阴性，但是，对于献血??应经过间接抗人球蛋白试验确定是否存在弱D表型。 [质量控制与附注] 抗D诊断试剂开封后，及时贴上开封时间标签，在效期内使用。 由于人红细胞的D抗原往往表现较弱，故必要时进行显微镜镜检，以免错判结果，特别是阴性结果时。 Rh血型鉴定应严格控制温度与时间，因Rh抗原、抗体集反应凝块比较脆弱，观察反应结果时，应轻轻侧动试管，不可用力振摇。 对于结果可疑的，必须洗涤红细胞后重新检验。 其它附注参见ABO血型鉴定。