南京建成SOD说明书.11-1222.docVIP

PAGE  PAGE 24 超氧化物歧化酶（SOD）测试盒 货号：A001 目录 试剂盒的介绍………………………………………………………………………2 测定意义……………………………………………………………………………2 测定原理……………………………………………………………………………2 试剂盒有效期和保存条件…………………………………………………………2 实验中所需的仪器和自备的试剂…………………………………………………2 总SOD的测定 ……………………………………………………………………3 高脂血症血清（浆）中SOD的测定 ……………………………………………6 红细胞中SOD的测定 ……………………………………………………………9 总SOD与分型SOD的测定方法 ⒈抽提法测CuZn-SOD………………………………………………………………12 ⒉SDS和KCl抑制Mn-SOD测定CuZn-SOD ………………………………………16 ⒊KCN抑制CuZn-SOD测定Mn-SOD ………………………………………………19 参考值 ……………………………………………………………………………22 注意点 ……………………………………………………………………………22 试剂盒优点 ………………………………………………………………………23 附录：SOD标准曲线的制备…………………………………………………….24 试剂盒的介绍 本试剂盒采用黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase SOD)活力，可测血清(浆)、脑脊液、胸水、腹水、肾透析液、尿液、红细胞、白细胞、血小板、心肌培养细胞、肿瘤培养细胞、各种动植物组织细胞及亚细胞水平(线粒体、微粒体)中的SOD活力，并可检测微生物、药物、食品、饮料、化妆品中的SOD活力。既适用于常规检验工作，又能满足科研工作的需要。 测定意义 . 超氧化物歧化酶（SOD）对机体的氧化与抗氧化平衡起着至关重要的作用，此酶能清除超氧阴离子自由基（O2－·）保护细胞免受损伤。因而SOD活力的高低与衰老、肿瘤、炎症、自身免疫病、血液病、心血管病、肾脏病、消化系统疾病、辐射、药物作用等有着密切的联系，对疾病的病因学探讨、诊断、治疗、术后的观察有着重要意义。 测定原理 通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子自由基（O2－·）, 后者氧化羟胺形成亚硝酸盐，在显色剂的作用下呈现紫红色，用可见光分光光度计测其吸光度。当被测样品中含SOD时，则对超氧阴离子自由基有专一性的抑制作用，使形成的亚硝酸盐减少，比色时测定管的吸光度值低于对照管的吸光度值，通过公式计算可求出被测样品中的SOD活力。 高等动物细胞内只有二种SOD即铜锌-SOD（CuZn-SOD）与锰-SOD(Mn-SOD), 二者相加等于总SOD(T-SOD)。KCN可抑制CuZn-SOD活力，而Mn-SOD活力不变，而经样本前处理过的样本中Mn-SOD活力丧失，但CuZn-SOD活力不变。 试剂盒有效期和保存条件 本试剂盒保存期：6个月；贮存温度：4℃，注意4号试剂不可放在0℃以下，否则酶会失效，所用塑料吸嘴尖要干净，最好消毒，或者用蒸馏水将新吸嘴尖头反复冲洗，一定要避免菌类及重金属离子污染。 实验中所需的仪器和自备的试剂 550nm的分光光度计 37℃恒温水浴锅 台式离心机 微量式移液器 蒸馏水 冰醋酸（分析纯） 总超氧化物歧化酶（T-SOD）活力的测定 一、试剂的组成与配制： （一）、100管试剂盒的组成与配制： 试剂一：贮备液：10ml×1瓶（天冷时或放冰箱会有部分结晶析出，需热水浴溶解后再用）； 试剂一应用液的配制：用时每瓶加蒸馏水稀释至100ml，4℃保存。 2、试剂二：液体10ml×1瓶，4℃～10℃保存。 3、试剂三：液体10ml×1瓶，4℃～10℃保存。 4、试剂四：液体350μl×2支，4℃保存，不可冷冻；4号稀释液5ml×2瓶，4℃保存。 用时二者按1∶14稀释，可以一次稀释，也可以分次稀释。配好的试剂四4℃保存，不可冷冻。配好后可保存2~3个月。注：所用吸嘴最好为专用且消毒处理过。 5、试剂五：粉剂×1支，用时加70℃~80℃热双蒸水75ml溶解后备用，若加热过程中水分蒸发减少，此时必须用蒸馏水补充至75ml，配好后的试剂避光4℃冷藏。 6、试剂六：粉剂×1支，用时加蒸馏水75ml溶解后备用，配好后的试剂避光4℃冷藏保存。 显色剂的配制：按照试剂五∶试剂六∶冰乙酸=3∶3∶2的体积比配成显色剂，4℃避光冷藏。 （二）、50管试剂盒的组成与配制： 试剂一：贮备液：5ml×1瓶（天冷时或放冰箱会有部分结晶析出，需热水浴溶解后再用）； 试剂一应用液的配制：用时加热蒸馏水稀释至50ml，4