2011艾滋病基本的技术讲训.pptVIP

2011艾滋病基础技术培训;什么是艾滋病病毒（HIV）;艾滋病的传播途径;艾滋病的检测方法;什么是ELISA方法;目前使用的ELISA试剂多为第三代及第四代ELISA试剂。 第四代试剂是最近发展起来的HIV抗原抗体联合测定试剂，可同时检测P24抗原和抗HIV-1/2抗体。与第三代抗HIV-1/2试剂相比，检出时间提前了4-9.1天，其优点在于能同时检测抗原、抗体，降低血源筛查的残余危险度。 ;什么是ELISA方法;什么是ELISA方法;;ELISA的成品试剂盒中包含以下各组分： (1)已包被抗原或抗体的固相载体(96孔板); (2)酶标记的抗原或抗体(结合物); (3)酶的底物（缓冲液和底物液或称A/B液）; (4)阴性对照品和阳性对照品(定性测定中) (5)有些试剂盒中还有标本的稀释液; (6)洗涤液（基本为通用的浓缩磷酸盐溶液）; (7)酶反应终止液（一般为弱硫酸液） ;必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、批批检验合格、在有效期内的试剂。推荐使用经临床质量评估敏感性和特异性高的试剂。 ; 1 HIV抗体检测可用于监测、诊断、血液筛查。 2 以监测为目的的检测是为了解不同人群HIV感染率及其变化趋势而进行的检测，检测的人群包括各类高危人群和一般人群。 3 以诊断为目的的检测是为了确定个体HIV感染状况而进行的检测，包括临床检测和自愿咨询检测、术前检测、根据特殊需要进行的体检等。 4 以血液筛查为目的的检测是为了防止输血传播HIV而进行的检测，包括献血员筛查和原料血浆筛查。 ;;最常用的样品是血液，包括血清、血浆和全血。唾液或尿液有时也可作为测试样品。 什么是血清：抽取静脉血，置于普通试管内，室温下自然放置1?2h，待血液凝固、血块收缩后再用3000r/min离心15min，吸出血清备用。 什么是血桨：抗凝静脉血，抽取静脉血后，置于加有EDTA或肝素等抗凝剂的试管，颠倒混匀数次，可用于CD4细胞检测。离心分离出的上清液为血桨。 血浆与血清的区别是上清液中存在纤维蛋白，容易产生假阳性。因此尽量上送血清样品。;用于抗体检测的血清或血浆样品，应存放于-20℃以下，短期（1周）内进行检测的样品可存放于2-8℃。 用于CD4+/CD8+T淋巴细胞测定的样品不能长期保存，样品采集时间超过48h则不可检测。;血液样本应及时检测，一般10个工作日内必须出具报告。 各筛查实验室必须对样品进行ELISA或化学发光法检测。不能只进行快速检测。 对于筛查阴性的样品出具： “HIV抗体阴性（—）”报告 ;实验室间传递的样品应为血清或血浆，除特殊情况外一般不运送全血。 应采用三级包装系统（WHO提出） NO.1 带螺帽的冻存管，要求防渗漏。 标注：姓名、种类以及采集时间。 ;NO.2 ：要求耐受性好、防渗漏、容纳并保护第一层容器，带盖子。（金属盒，硬塑料盒） NO.3：生物运输箱。外贴警示标签。 ;血清和血浆样品应在2?8℃条件下由专人运送。用于CD4+/CD8+T淋巴细胞测定的样品应在室温下18?25℃运送。 ;实验室需要重视的问题：cutoff值的计算;S/CO值的计算： S/CO值=样品OD值/cutoff值 S/CO值≥1为阳性，反之为阴性。 ;外部质控目的： 为了监控检测的重复性和稳定性， 试剂盒批间或孔间差异。 包括强阳性、弱阳性和阴性对照血清。也可以只设置一个弱阳性对照，以该试剂盒临界值（cutoff值）的2?3倍为宜。;外质控品可通过购买获得，不能使用试剂盒中的阴/阳性对照配制。 按一周实验用量分装、分类、标记、封口、-20℃冻存于非自动除霜冰箱中。 不可反复冻融，一旦融化后应该存放2?8℃，一周内用完。;60/110μl 阳性血清;对于检测量小的单位，可以使用“即刻法”进行质量控制。 对于检测量大的单位，可以使用常规方法（L-J法）进行质量控制。 ;“即刻法”质控是在对同一批外部质控血清（Q）进行连续测定3次后，即可对第3次检验结果进行质控。一直到20次后更换为“L-J法质控”为止。 具体计算方法如下：; ⑴将质控血清的测定值从小到大 排列： x1，x2，x3……xn (x1为最小值，xn为最大值)。 ⑵计算平均值 和标准差s。 ;⑶计算SI上限值 和SI下限值。 ⑷将SI上限、SI下限与“SI值表”中的数字比较。 ;即刻法质控;（4）当SI上限值和SI下限值n2s时表示处于控制范围内，可以继续测定。 （5）当SI上限值和SI下限值有一值处于n2s-n3s 值之间时说明该值在2s?3s范围，处于“告警”状态。 （6）当SI上限值和SI下限值有一