省教育廳科學研究项目2.doc

PAGE 11 省教育厅编号 项目类别理工类农林医类一般人文社科类 省教育厅科学研究项目 申 请 书 项 目　名　 称：SARS冠状病毒感染免疫学快速诊断试剂盒的研制申 请 者：所 在 单 位：电 话：传 真：电子信箱 (Email):申 请 日 期： 2002年制 填 报 说 明 一、申请书各项内容，要实事求是，逐条认真填写。表达要明确、严谨。外来语要同时用原文和中文表达。第一次出现的缩写词，须注出全称。除签名外，项目申请书必须是打印件。 二、申请书一律用A4纸，于左侧装订成册。第二页起各栏空格不够时，请自行加页。 三、封面上“教育厅编号”由教育厅填写，“项目类别”在相应的位置填???“重点”、“青年”、“一般”。 （封2） 简表 项目名称 SARS冠状病毒感染免疫学快速诊断试剂盒的研制类别基础研究　应用研究一般试验发展研究年限 2003年5月 至 2004 年6月申请经费 14万元项 目 负责人姓名年龄 48技术职务 教授已获学位硕士所学专业 病原生物学现从事专业 病原生物学主要研究人员姓 名年龄技术职务已获学位专业 签名30讲师硕士病原生物学30讲师硕士病原生物学28助教硕士临床检验33高级实验师硕士卫生检验37副教授硕士病原生物学 57教授本科病原生物学主要研究内容本研究拟通过生物信息学软件分析并寻找我国分离SARS冠状病毒株的S蛋白和M蛋白基因共同的保守序列，RT-PCR扩增该基因，克隆至真核表达载体，在哺乳动物细胞中表达，用纯化蛋白抗原制备的单克隆抗体来制备免疫金复合物，开发斑点免疫层析试纸条检测病毒的相应抗原；同时将纯化的抗原包被微孔板，用间接法酶联免疫吸附试验检测患者血清中的相应抗体，二者互为结合用于SARS冠状病毒感染的早期诊断。本研究将为基层医疗机构诊断SARS冠状病毒感染提供准确、特异、快速、方便、价廉的诊断试剂，为控制SARS冠状病毒在地级以下城市及广大农村的传播和感染提供有力的工具。是否我厅在建重点学科，学科名称：否1 二、立论依据 （包括项目的研究意义、国内外研究现状分析） 自2002年末在我国广东省发现首例非典型肺炎病例以来，该疾病至今已经广泛扩散到香港、越南、东南亚及加拿大和美国等近30个国家和地区，至5月2日世界卫生组织（WHO）统计全球患者已多达6054 多例，且发病人数仍有不断增加的趋势[1]。该病主要通过近距离空气飞沫和密切接触传播，起病急、传播快，病死率高达10％，WHO将这种传染病称为重症急性呼吸综合征（Severe Acute Respiratory Syndrome，SARS）。中国香港和大陆、加拿大、美国等国家的研究机构病原学调查研究表明引起该病的病原体是冠状病毒家族的一个新的变种，命名为SARS冠状病毒[2，3，4，5]。 冠状病毒是引起人类上呼吸道感染的病原，其感染在全世界各个地区广泛分布，主要发生在冬季和早春季节，通常引起成人的普通感冒，也是成人慢性气管炎患者急性加重的重要病原。冠状病毒分三个组群，组群1和2包括哺乳动物病毒，而组群3仅包括禽类病毒。人冠状病毒分别属于组群1和2，有OC43和229E两个抗原型，引起约30%中度上呼吸道感染疾病。SARS冠状病毒也是一种单正链RNA病毒，但研究结果表明该病毒是一个新的病毒变种：SARS冠状病毒可在Vero细胞中生长；病毒编码的制酶基因和S、E、M、N蛋白四基因的聚类分析表明该病毒和已知的三个组群有明显差别；用已知的冠状病毒抗原检测不到患者恢复期血清中的抗体[2]。 SARS冠状病毒感染具有很高的传染性和较高的死亡率，而且目前尚无特异性治疗和预防手段，因此迫切需要早期诊断以控制传染源和切断传播途径，减少对易感人群的危害。对SARS冠状病毒的早期诊断主要包括细胞培养方法分离病毒、逆转录PCR扩增病毒的RNA、血液中抗体检测等三种[6]。病毒的细胞培养是诊断该病的金标准，但培养要求高，生长时间长，阳性率很低，不适于早期诊断。逆转录PCR 具有高敏感性和特异性的优点，可以在感染后1到2天检测体内的病毒，虽然可以辅助临床诊断，但是病毒RNA提取困难、易降解，容易出现假阴性结果；且操作易污染，容易出现假阳性结果。抗体检测有间接免疫荧光和酶联免疫吸附试验（ELISA）两种，前者可以检测出病