常用生物学实验方法.pptVIP

实验方法;一、概述;二、分子生物学实验;三、从抗凝血中提白细胞;注意事项： 1.步骤2中，吸取白细胞时尽量小心。 2.步骤3、4中离心速率时间都相同。 3.最后一步中洗出白细胞后，如当时不继续实验，应加入保护液。—20℃保存。 ;四、从细菌中制备基因组DNA;步骤： 1.培养5ml的细菌培养物至饱和状态，取1.5ml的培养物3000rpm离心10分钟。 2.沉淀物加入567μl的TE缓冲液，用吸管反复吹打，使之重悬。加入30μl 10%的SDS和3μl 20 mg/ml蛋白酶K，混匀，用封口膜封口37℃水浴4小时（水浴前震荡摇匀，每30分钟摇匀一次）或者37℃温箱过夜。 3.加入100μl 5mol/L NaCl，充分混匀，再加入80μlCTAB/NaCl溶液，轻轻颠倒混匀，65℃水浴10分钟。 从这一步开始可以去除多糖和其他污染的大分子。 4.加入等体积的氯仿/异戊醇，轻轻颠倒混匀，离心13000rpm/10分钟/4℃。将上清液转入一个新管中，如果难以移出上清，先用牙签除去界面物质。; 5.加入等体积的酚/氯仿/异戊醇，轻轻颠倒混匀，离心13000rpm/10分钟/4℃，将上清液转入一只新管中。 对于某些细菌菌株由于氯仿抽提后形成的界面不够紧密，不容易移出上清液，这种情况下，在移出上清液之前，