流式细胞仪分选仪工作原理题库.pptxVIP

流式细胞分选仪工作原理;内 容;流式的概念;细胞术检测经典方法;流式细胞仪概念图;流式细胞术的特点;流式的检测对象;流式细胞仪的检测内容;流式分析原理;;液流系统;光学系统;光信号检测;散射光信号由细胞（颗粒）本身及其内容物对激光的折射产生，主要反映了细胞（颗粒）的物理特征如大小或内部复杂程度。;散射光信号;;;;荧光信号; 1) 抗原抗体结合（如表型测定，比如CD3-FITC） 2) 荧光素特异性结合（如周期测定，比如PI测定细胞周期） 3) 生物大分子之间的结合，如 PS 与ANNEXIN V的结合（凋亡测定） 4）通过相互作用引入荧光（FRET） 5）通过代谢不同对目标进行识别（SP染色） 6）通过电势能结合（膜电位测定）;荧光染料 EX EM 应用 ;;光电转换;流式分析流程;流式数据解读;流式图的解读;提供信息： ;流式的结果图例;影响流式检测的因素;样本制备;影响流式结果的参数设置;阈值/触发信号（Threshold / Triger） 数据采集的前提条件所选择的信号被称为阈值或触发信号 阈值可以量化，大于该阈值的细胞信号才会被收集，以排除不必要杂质的干扰 ;电压增益;※ 电压调节 阴性对照（同型对照，空白对照）： ;荧光干扰（补偿 Compensate） 当细胞携带两种或两种以上的荧光素时，受到激光激发会发射出两种或以上波长的荧光。 由于目前所使用的荧光染料发射谱较宽，虽然他们之间各自发射峰值各不相同，弹发射谱范围有一定的重叠，会对其他通道上的数值产生影响。 ;;※ 补偿调节 单染管（表达单一荧光的样本） 一定要使用阳性组，或阳性处理组，只有阴性群的样本无法调节电压。可以使用VeserComp一类的自动捕获抗体微球代替。 ;荧光补偿（Compensate） FITC单染 ;荧光补偿（Compensate） PE单染 ;验证 ;圈门设门（Gate） 圈门是在流式图中根据需要圈定一群细胞。 设门是将门内的细胞应用在其他图中进行进一步的分析。 门的种类很多，包括水平门、十字门、铰链门、多边形们、矩形门、椭圆型门等等。;圈门;设门（Gate）;流式分选;基于免疫荧光的单细胞分选; ;实验样品的准备;仪器设置：液滴形成;喷嘴选择;细胞随机分布情况;频率和???幅的调节;Drop Delay检测和维持;液流稳定;分选模式;多群同时收集;Questions;Thank you！