细菌λ Red重组技术的应用及其影响因素 (1).pdfVIP

动物 医学进展 ，????，?????：??—??? ????????????? ??????????? ???????? 细 菌 入???重 组 技 术 的应 用 及 其影 响 因 素? 付 喜 爱 ，张 德 显 ，周? 维 ，于 立辉 ，田春 莲 ，刘 明春? ?沈 阳 农 业 大 学 畜 牧 兽 医学 院 ，辽 宁 沈 阳 ???????? 摘? 要 ：由? 噬 菌体 的 ???、????、?????个基 因分别 编码 的 ???、????和 ??? 蛋 白组成? ???同 源重 组? 系统 。入???重组 是 细 菌靶 基 因置换 的 有效技 术 ，该技 术 发展迅 速 ，已广泛 应 用 于大肠 埃 希 菌等 细 菌 染 色体? ??? 的基 因敲 除 、基 因整合 ，可 以对 任何 大 小 的 ??? 分 子进 行 精 确修 饰 。利 用? ???重组 系统 不 仅 可 以? 构建 工程 菌 ，还 可 以为研 究细 菌的 致病机 理 和耐 药机 制提供 新 的 方法 。然 而 ，许 多应 用 因重组频 率 而 受到限? 制 ，影响 重组 频 率的 因素 主要 有底 物 浓度 、同 源片段 的 长度 、内源性 核 酸酶 、错 配蛋 白等 。论 文 综述 了? ???? 同源重 组技 术的 应 用进 展 及影 响 重组 的 因素 ，以期 为优化 重组 试验 方案 及提 高试 验 的成功 率提 供 帮助 。? 关键 词 ：????同源重组 ；应 用 ；底 物 ；内源性核 酸酶 ；错 配蛋 白? 中 图 分 类 号 ：???? 文 献 标 识 码 ：?? 文 章 编 号 ：?????????????????—????—??? 同源 重组 是 指发 生在 姐妹 染色 体 之 间或 同一染? 缺失 对 ????? 重 组 的效率 没有 影 响 ，??? 缺 失重 组? 色体 上 含有 同源 序 列 的 ??? 分 子 之 间或 分 子 之 内? 率 大 约降低 为 原 来 的 ?／?，说 明 ?????? ???重 组? 的重 新组 合 ，常用 于基 因敲除 或者 置 换 。 目前 ，同源? 中只有 ????是必 不可 少 的 。??????????? 等? 研 究? 重组 中以 入???同源 重 组 系 统 在 细 菌 中应 用 最 广 。? 支持 全 长 的 ?????作 为重 组 中间体 ，有 助于 阐 明 内? ???同源重组 系统是 由 入噬菌 体 的 ???、????、?????? 源 性核 酸酶 如何 作 用 于 重 组 的 ????? 和 ?????，? 个基 因分 别 编码 的 ???、???????和 ??????蛋 白组? 为? ???重组 机 制 提 供 了新 的见 解 ，对 正 确 应 用 重? 成 。?蛋 白抑 制 内源 性 ?????? 和 ?????核 酸酶作? 组技 术 就有