第五章沉淀分离选编.ppt

生物分离过程的一般流程;第五章 沉淀分离;5.1 概述;5.1 概述;沉淀法操作步骤 ： ①首先加入沉淀剂； ②沉淀剂的陈化，促进粒子生长； ③离心或过滤，收集沉淀物。 加沉淀剂的方式和陈化条件对产物的纯度、收率和沉淀物的形状都有很大影响。;5.1 概述;5.1 概述;5.1 概述;5.1 概述;5.2 盐析法;5.2.1 基本原理;5.2.1.1盐析原理;5.2.1.1盐析原理;5.2.1.1盐析原理;lgS （溶解度）;5.2.1.2 Cohn方程式;关于β值： （1）β值与盐的种类无关，在式（5-1）中，令I=0，则： β=lg S0 （5-3） S0表示在纯溶剂中（即I=0）蛋白质的溶解度，由此可见β是一个与盐的种类无关的常数。β值的大小主要决定于蛋白质的性质。 （2）β值不可能直接测定 β值是假定离子强度I=0时，用外推法求出的。事实上由于盐溶作用的存在，I=0时的溶解度比低盐溶液要低。 （3）β值随温度和pH而变 ;关于KS——主要取决于蛋白质和盐的种类，而与温度和pH无关。 （1）KS与蛋白质种类的关系 对于不同的蛋白质，KS值的变化不是很大，大多不超过1倍。一般地：组成相同的蛋白质，分子量越大，KS较大，沉淀所需用盐量越少；蛋白质分子不对称性越大，KS值较大，越容易沉淀。 如表5-2所示为采用硫酸铵盐析时不同蛋白质的盐析常数。 表5-2 硫酸铵对不同蛋白质的盐析常数 ; （2）KS与盐种类的关系 不同种类的盐，对KS的影响较大。KS值较大，就意味着该盐的盐析效果好，其中阴离子的影响较显著，而阳离子的影响是第二位的。 对于阴离子，含高价阴离子的盐，效果比低价的好。常用阴离子的盐析效果排列如下： 柠檬酸盐＞PO43-＞SO42-＞CH3COO- ＞Cl-＞NO3-＞SCN- 对于阳离子，一般地高价阳离子（如Mg2+、Ca2+）不如低价阳离子，常用一价阳离子的盐析效果排列如下： NH4+ ＞K+ ＞Na+ 而常用盐析剂盐析效果的排列顺序为： NaH2PO4 ＞(NH4)2SO4＞Na2SO4＞MgSO4＞NaCl;表5-1 不同盐类对碳氧血红蛋白的KS值和β值 用不同盐类采用外推法求β值时，因温度和pH等条件不同，β值会有所变动。如表5-1所示，各种盐类对碳氧血红蛋白的β值在3.0左右。;5.2.1.3 分段盐析法 ;20;5.2.1.3 分段盐析法 ;5.2.2 影响盐析的若干因素 ; 蛋白质起始浓度;5.2.2.1 蛋白质的浓度与盐析的关系;5.2.2.2 pH对盐析的影响;pH;5.2.2.2 pH对盐析的影响;5.2.2.3 温度对盐析的影响 ;;5.2.3 硫酸铵盐析法 ;5.2.3 硫酸铵盐析法 ;硫酸铵的加入有以下几种方法： 1）加入固体盐法 用于要求饱和度较高而不增大溶液体积的情况；工业上常采用这种方法，加入速度不能太快，应分批加入，并充分搅拌，使其完全溶解和防止局部浓度过高； 2）加入饱和溶液法 用于要求饱和度不高而原来溶液体积不大的情况；它可防止局部过浓，但加量较多时，料液会被稀释。 3）透析平衡法 先将盐析的样品装于透析袋中，然后浸入饱和硫酸铵中进行透析，袋内饱和度逐渐提高，达到设定浓度后，目的蛋白析出。该法优点在于硫酸铵浓度变化有连续性，盐析效果好，但程序烦琐，故多用于结晶。;5.2.3.1 硫酸铵的预处理;5.2.3.2 硫酸铵饱和度的调整（分段盐析）;5.3 有机溶剂沉淀法 ;有机溶剂沉淀法具有如下特点：;5.3.2 有机溶剂的选择 ;5.3.3 有机溶剂沉淀的影响因素 ;（3）样品浓度 ;（4）金属离子的影响 ;（5）离子强度的影响 ;5.4 非离子多聚物沉淀法 ——最早用于 提纯免疫球蛋白;5.4.2 常用非离子多聚物;5.4.3 影响PEG沉淀法的主要因素;5.4.4 PEG沉淀法特点;5.5 其他沉淀法;5.5.1 等电点沉淀法;5.5.1 等电点沉淀法;5.5.2 生成盐类复合物沉淀法;5.5.2.1 金属离子沉淀法;5.5.2.1 金属离子沉淀法;5.5.2.2 有机酸沉淀法;5.5.3 选择变性沉淀法;练习题