根癌农杆菌介导的绿色木霉HP35-3转化及表达体系的构建.pdfVIP

基因组学与应用生物学，????年，第 ??卷 ，第 ?期，第 ???—???页? ????????????????????????????，????，???．??，??．?，???— ???? 研 究报 告? ???????????????? 根癌农杆菌介导 的绿色木霉 ??????转化及表达体系的构建? 潘 家 茂 ? 蓝健 益 ? 郑 小群 ? 秦 秀林 ?，? 冯家 勋?，? 刘 君梁?，? ?广西大学生命科学与技术学 院，南宁，??????；?广西亚热带生物资源保 护利用重 点实验室，南宁，??????? 通讯作者，????????．???????．???? 摘 要 本研 究通 过根癌 农 杆菌 介导 转化法 ，构建 丝状 真 菌绿 色木 霉 ????—?的遗传 转化 表达 体系 ，并 以红? 色 荧 光蛋 白基 因????????为 报告 基 因来验 证本 表达 体系 。首先构 建含 有潮 霉素 抗性基 ???????、磷 酸甘 油 醛? 脱 氢 酶启 动子??????和红 色荧 光蛋 白基 因????????的双元 载体 ?????．?????。然 后将 该双 元载体 转化 到根? 癌 农 杆菌 ??????中，并筛 选 阳性转 化子 。将 该转 化子 和绿 色 木霉 ????—?分 生 孢子 进行 液体 共培 养 ，并在? 含 有 ??????／??潮 霉素 抗 性平 板上 筛选 出绿色 木 霉 ????—????阳性转 化子 。最后 分别 通 过如 下三 种 方法? 检测 ：提取 ????—????的总 ???进行 ???验证；对菌丝体进行荧光显微镜观察 ；对菌丝体提取物进行荧? 光酶 标仪 检测 。结 果表 明：获得 的转 化子 能够 稳 定遗传 ，外源 红色 荧光 蛋 白基因整合 到 木霉 ????—?的基 因? 组 中并成 功表 达 。? 关键 词? 根癌 农杆 菌．丝状 真菌?红色 荧光 蛋 白? ????????????????????????????????????????????—??????????????????????????? ???????????????????????????——???????????????????????? ??????????? ?????????? ?????????????? ???????????。 ????????????。 ????????????? ????????????????????????????????????????，????????????????，???????，??????；??????????????????????????? ????????????????????????? ???????? ?????????????????????????????，??????，??????? ????????????????????，????????．???????．???? ???：??．?????／?．???．???．??????? ????????? ?????????????，????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????? ???????????—????????????????????????????????????—???????????????? ?????．??????????????????????????????? ?????????????????????????????．???????????????????????