第2章 实验室设备和一般技术.pptVIP

第二章 实验室设备和一般技术;组织培养实验室的面积大小和装备程度取决于两个因素：;标准的组织培养实验室应当具备设施;第一节 实验室设计和常用设备 第二节 器皿用具 第三节 培养条件 ;第一节 实验室设计和常用设备;;（一）准备室;（二）缓冲室 ;（三）无菌操作室;（四）培养室;（五）驯化室;（六）温室;;;;;二、常用设备;1．超净工作台 2．无菌箱 3．空调机 ;4．除湿机：湿度也要求恒定，一般保持70%- 80%，湿度过高易滋长杂菌，湿度过低培养器皿 内的培养基会失水变干，从而影响外植体的正 常生长。湿度过高时，可采用小型室内除湿机 除湿，当湿度过低时，可采用喷水来增湿。;6．烘箱：可以用80?C-100?C的温度，迅速干 燥洗净后的玻璃器皿。也可以用160?C-180?C的 温度，进行1h-3h的高温干燥灭菌。还可用80?C 的温度烘干组织培养植物材料，以测定干物质。 ;各种型号的高压灭菌锅;8．冰箱 有普通冰箱、低温冰箱等。用于在常温下易变性或失效的试剂和母液的储藏，细胞组织和试验材料的冷冻保藏，以及某些材料的预处理。 ;百分之一天平;10．显微镜: 包括双目实体显微镜（解剖镜）、 生物显微镜、倒置显微镜和电子显微镜。显微镜 上要求能安装或带有照相装置，以对所需材料进 行摄影记录。有：双目实体显微镜、生物显微镜 倒置显微镜。 ;12．摇床（振荡培养机):在液体培养中为了 改善浸于液体培养基中的培养材料的通气状况， 可用摇床来振动容器。 ;体视显微镜;14．蒸馏水发生器: 制备培养基所用的重蒸馏水，是将蒸馏水再蒸馏一次，使水中不含或少含某些离子。一种是用蒸馏水重新蒸馏，另一种是用自来水连续蒸馏两次，以获得重蒸馏水。此外，还可用纯水发生器将自来水制成纯净的实验室用水，生产速率可达到4 L /h、15 L/h或40L/h（因型号而异）。这种水与“试剂级”水比较，其杂质的含量仍然太高，但却得到了质量一致的较好的实验室用水。;15．酸度计 用于校正培养基和酶制剂的pH值。半导体小型酸度测定仪，既可在配制培养基时使用，又可在培养过程中测定pH值的变化。 ;;;;第二节 器皿用具;1．培养器皿;（2）类型;按形状分;2．分注器 ;3．离心管;4．刻度移液管; 移液器; 培养基中有些生长调节物质以及有机附加物质如吲哚乙酸（IAA）、赤霉素（GA）等，在高温条件下易被分解破坏，而用细菌过滤器（图1—7）既可除菌又可保持试剂的功效。可用金属制的蔡式漏斗，以石棉滤膜来除去细菌。在过滤少量的液体时，宜用醋酸纤维素和硝酸纤维素混合物制成的微孔滤膜，其孔径为0.45μm。在过滤时需要一套减压吸滤设备（通常使用真空泵），漏斗下接吸滤瓶，吸嘴处接上一只内装脱脂棉的滤气玻璃管。;图1—7 细菌过滤器灭菌装置;（二）器皿的清洗; 1．洗涤剂——清洗玻璃器皿用的洗涤剂主要有肥皂、洗洁精、洗衣粉和铬酸洗涤液（由重铬酸钾和浓硫酸混合而成）。;2．洗涤方法; 已被霉菌等杂菌污染的玻璃器皿的洗涤： 121℃高温高压蒸汽灭菌30min——趁热倒去残 渣——清水中冲洗——浸泡在浓的重铬酸钾洗 涤液中——2h后取出——水洗数次——蒸馏水 冲淋1次。 ; 用过的载玻片和盖玻片的清洗: 洗涤液中浸泡数小时——水洗——绸布擦干——放在95%的洒精中备用。 总之，要求洗净的玻璃器皿应透明发亮，内外壁水膜均匀，不持水珠。;二、器械用具;4.显微接种工具 包括接种针、接种钩及接种铲，由白金丝或镍丝制成，用来接种花药或转移植物组织。 5.钻孔器 取肉质茎、块茎、镜肉质根内部的组织时使用。钻孔器一般做成T形，口径有各种规格 ;1—8 植物组织培养中常用的器械 1．镊子 2．剪刀 3．解剖刀 4．接种针和接种钩;第三节 培养条件;3.1温度 ;3.2光照 ;3.2.1光照强度 ;3.2.2光质 ;3.2.3光周期 ;3.3湿度 ; 环境的相对湿度可以影响培养基的水分蒸发，一般要求70％-80％的相对湿度，常用加湿器或经常洒水的方法来调节湿度。湿度过低：会使培养基丧失大量水分，导致培养基各种成分浓度的改变和渗透压的升高，进而影响组织培养的正常进行。 湿度过高时：易引起棉塞长霉，造成污染。 ;3.4 渗透压 ;3.5 pH值 ;大多在5～6.5左右，一般培养基皆要求5.8，这基本能适应大多植物培养的需要。 pH值适度因材料而异， 因培养基的组成而不同。 以硝态氮作氮源和以铵态氮作氮源就不一样，后者较高一些。 一般来说当pH值高于6.5时，培养基全变硬； 低于5时，琼脂不能很好地凝固。 因为高温灭菌会降低pH值(约0.2～0.3