HPLC法测定清开灵注射液中猪去氧胆酸的含量的论文.docVIP

　　HPLC法测定清开灵注射液中猪去氧胆酸的含量的论文 【摘要】 目的 建立清开灵注射液中猪去氧胆酸的含量测定方法。方法 采用hplc法,色谱柱为ultimatexb-c18 (5 μm,250 mm×4.6 mm),流动相为乙腈-水-磷酸(35∶65∶0.1),流速为1 ml/min,柱温为40 ℃,检测波长为192 nm。结果 猪去氧胆酸在0.201 35～1.006 75 mg/ml范围内线性关系良好,r＝0.999 6,平均加样回收率为98.25%,rsd＝1.26%。结论 方法准确、可靠,重复性好,可用于清开灵注射液的质量控制。 【关键词】 高效液相色谱法；清开灵注射液；猪去氧胆酸 abstract：objective to establish a method for content determination of hyodeoxycholic acid in qingkailing injection. methods an ultimatexb-c18 column (5 μm, 250 mm×4.6 mm) obile phase of acetonitril-l/min. the temperature of the column . results there g/ml, r＝0.999 6. the average recovery ethod a,纯度98%)；清开灵注射液(市售样品3批, 10 ml/支,吉林省集安益盛药业股份有限公司生产)。乙腈为色谱纯,其余所用试剂均为分析纯。 　　2 方法与结果 　　2.1 色谱条件 　　参考2005版《中华人民共和国药典》(一部)清开灵注射液中胆酸含量测定的色谱条件[2]。经比较色谱峰分离情况以及分离度,确定的色谱条件为色谱柱ultimatexb-c18 (5 μm,250 mm×4.6 mm),流动相为乙腈-水-磷酸(35∶65∶0.1),流速为1 ml/min,柱温为40 ℃,检测波长为192 nm。 　　2.2 溶液制备 　　2.2.1 对照品溶液的制备 　　 　　精密称取猪去氧胆酸对照品适量,加60%乙腈制成每1 ml含2.013 5 mg的溶液,作为对照品溶液。 　　2.2.2 供试品溶液的制备 　　精密量取本品10 ml,加稀盐酸0.5 ml,用醋酸乙酯提取4次(20、20、15、15 ml),合并醋酸乙酯液,蒸干,残渣加60%乙腈适量使溶解,并转移至25 ml量瓶中,用60%乙腈稀释至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45 μm)滤过,取续滤液,即得。 　　2.2.3 阴性溶液的制备 　　取缺胆酸、猪去氧胆酸的阴性制剂,按供试液溶液制备方法制备,即得。 　　2.3 专属性试验 　　分别吸取猪去氧胆酸对照品溶液、供试品溶液与阴性溶液,按上述色谱条件进行检测,结果供试品、猪去氧胆酸对照品在相应时间出现猪去氧胆酸特征吸收峰,阴性溶液无干扰吸收峰。结果见图1。 　　2.4 标准曲线及线性范围 　　分别精密吸取猪去氧胆酸对照品溶液1、2、3、4、5 ml,加60%乙腈稀释至10 ml,在上述色谱条件下,进样10 μl,测定峰面积值。以峰面积平均值和对照品溶液浓度进行回归处理,回归方程为：a＝5.755 10×105c－2.114 200×103,r＝0.999 6；猪去氧胆酸在0.201 35～1.006 75 mg/ml浓度范围内与峰面积呈良好线性关系。 　　2.5 最低检测限 　　取0.201 35 mg/ml的对照品溶液用60%乙腈稀释1倍,得0.101 675 mg/ml的溶液,取10 μl进样测定,s/n＝3,故最低检测限为1 μg。 　　2.6 精密度试验 取浓度为0.604 05 mg/ml对照品溶液10 μl进样测定,连续6次,结果rsd＝1.6%。 　　2.7 重复性试验 取清开灵注射液样品,按照“2.2.2”项下方法制备供试液,平行试验6份,测定猪去氧胆酸的含量,结果rsd＝2.4%。 　　2.8 稳定性试验 取供试品溶液,每隔2.0 h进样10 μl,测定猪去氧胆酸12 h内的峰面积值,结果rsd＝2.8%。 　　2.9 加样回收率试验 精密称取猪去氧胆酸对照品,配制成浓度为2.013 5 mg/ml对照品溶液。另取清开灵注射液(批号060102)5 ml,平行试验9份,分别加入对照品溶液,按上述色谱条件测定,结果见表1。 表1 加样回收率试验结果(略) 　　2.10 样品含量测定 取本品3批(批号分别为060101、060102、060103),按供试品溶液制备方法制备供试液,测定猪去氧胆酸的含量,结果见表2。表2 3批样品中猪去氧胆酸的含量测定结果(略) 　　3 讨论 醋酸乙酯振摇提取次数对猪去氧胆