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细胞生物学期末整理 第二章细胞的统一性与多样性 1．细胞是生命活动的基本单位。 一切有机体都由细胞构成，细胞是构成有机体的基本单位 细胞具有独立的、有序的自控代谢体系， 细胞是代谢与功能的基本单位 细胞是有机体生长与发育的基础 细胞是遗传的基本单位，细胞具有遗传的全能性 没有细胞就没有完整的生命 2. 细胞的基本共性 ?所有的细胞表面均有由磷脂双分子层与镶嵌 蛋白质构成的生物膜，即细胞膜。 ?所有的细胞都含有两种核酸：即DNA与RNA 作为遗传信息复制与转录的载体。 ?作为蛋白质合成的机器─核糖体，毫无例外地 存在于一切细胞内。 ?所有细胞的增殖都以一分为二的方式进行分裂。 3. 病毒的基本知识 ?病毒（virus）——核酸分子（DNA或RNA）与蛋白质构成的核酸-蛋白质复合体； 根据病毒的核酸类型可以将其分为两大类： ? DNA病毒与RNA病毒 ? 病???的多样性） ?类病毒（viroid）——仅由感染性的RNA构成； ?朊病毒（prion） ——仅由感染性的蛋白质亚基构成； 4. 原核细胞 基本特点：遗传的信息量小，遗传信息载体仅由一个环状DNA构成；细胞内没有分化为以膜为基础的具有专门结构与功能的细胞器和细胞核膜。 主要代表： ?支原体（mycoplast）——目前发现的最小最简单的细胞； ?细菌 ?蓝藻又称蓝细菌（Cyanobacteria） 5. 真核细胞的基本结构体系 ?以脂质及蛋白质成分为基础的生物膜结构系统； ?以核酸（DNA或RNA）与蛋白质为主要成分的遗传信息表达系统 ?由特异蛋白分子装配构成的细胞骨架系统。 第三章细胞生物学研究方法 1．几种光学显微镜 ?相差显微镜（phase-contrast microscope） 将光程差或相位差转换成振幅差，可用于观察活细胞 ?微分干涉显微镜（differential-interference microscope） 偏振光经合成后，使样品中厚度上的微小区别转化成明暗区别，增加了样品反差且具有立体感。适于研究活细胞中较大的细胞器 ?录像增差显微镜技术（video-enhance microscopy） 计算机辅助的DIC显微镜可在高分辨率下研究活细胞中的颗粒及细胞器的运动 。 2. 扫描遂道显微镜 原理：扫描探针与样品接触或达到很近距离时，即产生彼此间相互作用力，如量子力学中的隧道效应（隧道电流）、原子间作用力、磁力、摩擦力等并在计算机显示出来，从而反映出样品表面形貌信息、电特性或磁特性等。 3. 细胞组分的分析方法 离心分离技术 ?用途：于分离细胞器与生物大分子及其复合物 ?差速离心：分离密度不同的细胞组分 ?密度梯度离心：精细组分或生物大分子的分离 细胞内核酸、蛋白质、酶、糖与脂类等的显示方法 原理：利用一些显色剂与所检测物质中一些特殊基团特异性结合的特征，通过显 色剂在细胞中的定位及颜色的深浅来判断某种物质在细胞中的分布和含量。 特异蛋白抗原的定位与定性 ?免疫荧光技术：快速、灵敏、有特异性，但其分辨率有限 ?蛋白电泳(SDS)与免疫印迹反应(Western-Blot) ?免疫电镜技术： ?免疫铁蛋白技术 ?免疫酶标技术 ?免疫胶体金技术 应用：通过对分泌蛋白的定位，可以确定某种蛋白的分泌动态；胞内酶的研究；膜蛋白的定位与骨架蛋白的定位等 细胞内特异核酸的定位与定性 ?光镜水平的原位杂交技术 （同位素标记或荧光素标记的探针） ?电镜水平的原位杂交技术 （生物素标记的探针与抗生物素抗体相连的胶体金标记结合） 放射自显影技术 ?原理及应用： ?利用同位素的放射自显影，对细胞内生物大分子进行定性、定位与半定量研究； ?实现对细胞内生物大分子进行动态和追踪研究。 ?步骤： ?前体物掺入细胞（标记：持续标记和脉冲标记） ?细胞内同位素所在位置的显示 ———放射自显影 定量细胞化学分析技术 ? 细胞显微分光光度术（Microspectrophotometry） ?利用细胞内某些物质对特异光谱的吸收，测定这些物质（如核酸与蛋白质等）在细胞内的含量。 包括： 紫外光显微分光光度测定法 可见光显微分光光度测定法 ? 流式细胞仪（Flow Cytometry） ?主要应用： 用于定量测定细胞中的DNA、RNA或某一特异蛋白的含量； 测定细胞群体中不同时相细胞的数量； 从细胞群体中分离某些特异染色的细胞； 分离DNA含量不同的中期染色体。 单克隆技术：将b淋巴细胞与肿瘤细胞杂交，使得子代细胞具有两种亲本细胞的特性，既可以分泌抗体，又可以像肿瘤细胞一样无