色谱法概论选编.ppt

色谱法概论;;第一节 概述;色谱法的发展历史;早期的色谱技术只是一种分离技术而已，与萃取、蒸馏等分离技术不同的是其分离效率高得多。当这种高效的分离技术与各种灵敏的检测技术结合在一起后，才使得色谱技术成为最重要的一种分析方法，几乎可以分析所有已知物质，在所有学科领域都得到了广泛的应用。;;;;高效液相色谱的样品;高效液相色谱 - 组分分离;高效液相系统;检测器;气相-质谱系统;气相色谱系统;生命科学;食品与香料;石化;环境;;;;;;二、色谱法的几个重要术语* 1. 色谱柱（column） 在茨威特实验中,装有CaCO3的玻璃管,即是一根色谱柱(是指包括CaCO3的管). 2. 固定相 (stationary phase) 在柱内固定不动的一相称固定相,如CaCO3. 3. 流动相(mobile phase) 在柱内不断流动的一相,称流动相,如石油醚. 4. 被分离组分（样品） 如色素;;三、色谱法分类;续前;续前;;;第二节 色谱过程与术语;分离任何物质都要依据它们性质的差异。 例如蒸馏是利用沸点的差异，沉淀、结晶是利用溶解度不同。 在色谱当中，是利用物质在两相中溶解、亲和、吸附或其它亲和作用力的不同，使混合物中各组分达到了分离。 例如：分离含A、B两种组分的混合溶液。;当组分进入柱后，由于组分与固定相间的亲合力，就要被固定相所滞留，即固定相对组分有滞留作用（保留作用），组分的性质不同，则固定相对不同组分的滞留能力（保留能力）不同。 组分与固定相之间的亲合力越大，则固定相对该组分的滞留越强烈。它随流动相移动的速度就较慢；反之，组分在柱内的移动速度快；从而造成了A、B在柱内的差速迁移，即移动速度不同。 当经过一段距离后，速度的差异造成A、B组分先后出柱，得到分离。这就是色谱过程的本质。;掌握的要点： （1）组分在柱内随流动相不断移动（溶解于流动相）。 （2）固定相与组分有亲合能力，即对组分有滞留能力（保留能力），使组分的速度低于流动相速度。 （3）性质不同的组分与固定相亲合力不同，固定相对其滞留能力（保留能力）不同，造成迁移速度不同（差速迁移）。 （4）经过一定柱长后，各组分因速度差异而分开，即需要一定的柱???。;二、色谱流出曲线（色谱图） 所谓色谱流出曲线，即流出液中的组分浓度随洗脱体积或洗脱时间的变化曲线，也称色谱图。;获得： （1）间隔一定时间或一定流出体积，测定流出液中组分的浓度，以浓度（检测信号）为纵坐标，时间或体积为横坐标，描点作图即得 （2）在柱子出口处设置检测器，如测定流出液的吸光度，换算成浓度（信号值），连续记录流出液的检测信号随时间的变化，即得色谱图（仪器化）。 流出曲线是柱内组分分离结果的反映，是研究色谱分离过程机理的依据，也是定性、定量的依据。 ;;三、几个重要的色谱参数及概念;;（6）拖尾因子T: 0.95～1.05，色谱峰为对称峰;（7）保留时间(tR)（Retention time） 流动相携带组分通过柱子所需要的时间，即从进样洗脱到流出液中组分的浓度出现极大值点所需要的时间。 （8）死时间(t0) 不被固定相所滞留的组分通过色谱柱所用的时间，即不被固定相所滞留的组分的保留时间，即死时间。 在时间上，它等于流动相分子通过色谱柱所需的时间，当某组分不被固定相所滞留时，即完全随流动相移动，其移动速度完全等于流动相的速度，所以t0=tm。;;;（13）相对保留值（α2,1，γ2,1） 以一已知物的调整保留值为基准，其它各组分的调整保留值与之比值即为α2,1，γ2,1。 α2,1=tR 2’/tR 1’=VR 2’/VR 1’=γ2,1 须注意： ① 规定对于α2,1须有tR 2’tR1’ VR 2’VR 1’ 即α2,11。 ② 对于γ2,1, “1”表示基准物质, “2”表示待测物质,用于定性分析。 ③ 相对保留值只与固定相、组分及流动相的性质有关,与柱长、流速等无关。 ④ 若两组分能分离,则α2,11 ⑤ α2,1又称为选择性因子;;;;图示;第三节 色谱法基本原理 ;一、色谱法分离过程的动力学观点;1、组分在色谱柱内的移动速度（绝对速度） 被分离的组分以一定的速度随流动相迁移。当考虑一个分子时，它的迁移速度受两个因素影响： （1）被固定相滞留在固定相表面，分子停止前进，这时速度u组分=0。 （2）溶解于流动相中，随流动相同速前进，这时u组分=um。 所以组分分子在柱内的移动速度总是≤流动相在柱内的速度，即um 是极限速度。 组分移动速度的大小，决定于固定相对组分的保留能力，即固定相与组分间作用力的大小。 不同的组分，固定相对它的保留能力不同，其移动速度不同。 设组分的移动速度为u组分（u组分=L/tR）， 即绝对速度，此速度受到流动相流速的影响，人们将两个组分的