二章节酶促反应动力学.pptVIP

第二章 酶促反应动力学;主要内容 1、酶促反应动力学的特点 2、均相酶促反应动力学 3、固定化酶促反应动力学 4、酶的失活动力学 ;2.1 酶促反应动力学的特点;2.1.3 酶和细胞的固定化技术;2.1.4 酶促反应的特征;2.2 均相系酶促反应动力学;三、二级反应，即A + B → C ;对于连锁反应，如， ;2.2.2 单底物酶促反应动力学;三点假设 1、底物浓度S 远大于酶的浓度efree ，因此x的形成不会降低底物浓度S ，底物浓度以初始浓度计算。 2、不考虑P + E → ES这个可逆反应的存在。要忽略这一反应，必须是产物P为零，换言之，该方程适用于反应的初始状态。 3、ES → E + P是整个反应的限速阶段，也就是说E + S = ES的可逆反应在初速度测定时间内已达到平衡。ES分解生成产物的速度不足以破坏这个平衡。;式中rs为底物消耗速度（负号表示减少）； rp为产物生成速率； Ks为平衡常数,其又称饱和常数（saturation constant）。;利用稳态法获得米氏方程，同样基于三点假设。其中第（1）和（2）两点与快速平衡法一致，第三点是在基于底物浓度比酶的浓度高得多，中间复合物ES分解时所得到的酶又立即与底物结合，使中间复合物浓度维持不变。即在这段时间里，x的生成速率与x的消失速率相等，达到动态平衡，即所谓“稳态”。;在实际的酶促反应中，人们关心的是反应时间与底物转化率的关系．所以，基于t=0，S=S0初值积分得;谢 谢 大 家 ;第二章 酶促反应动力学;2.1 酶促反应动力学的特点; 经典酶学研究中，酶活力的测定是在反应的初始短时间内进行的，并且酶浓度、底物浓度较低，且为水溶液，酶学研究的目的是探讨酶促反应的机制。 工业上，为保证酶促反应高效率完成，常需要使用高浓度的酶制剂和底物，且反应要持续较长时间，反应体系多为非均相体系，有时反应是在有机溶剂中进行。;2.2 均相酶促反应动力学 2.2.1 酶促反应动力学基础 　　可采用化学反应动力学方法建立酶促反应动力学方程。 对酶促反应 　　　　　 ，有： ; 对连锁的酶促反应，　　　　　　 ;2.2.2 单底物酶促反应动力学 2.2.2.1 米氏方程 　　 根据酶－底物中间复合物假说，对单底物酶促反应　　 ，其反应机制可表示为：　;快速平衡法推导动力学方程： 几点假设： （1）CSCE，中间复合物ES的形成不会降低CS。 （2）不考虑这个可逆反应。 （3） 为快速平衡， 为整个反应的限速阶段，因此ES分解成产物不足以破坏这个平衡。;解之，得;稳态法推导动力学方程： 几点假设： （1）CSCE，中间复合物ES的形成不会降低CS。 （2）不考虑这个可逆反应。 （3）CSCE中间复合物ES一经分解，产生的游离酶立即与底物结合，使中间复合物ES浓度保持衡定，即 。 ;;米氏方程 ;对米氏方程的讨论： 当CSKm时，　　 ，属一级反应。 当CSKm时，　　，属零级反应。 当CS＝Km时，　　。Km在数量上等于反应速度达到最大反应速度一半时的底物浓度。;双倒数法(Linewear Burk): 对米氏方程两侧取倒数，得 ,以 作图，得一直线，直线斜率为 ，截距为 ,根据直线斜率和截距可计算出Km和rmax。 ;－1／Km;2.2.2.2 抑制剂对酶促反应速率的影响 失活作用 抑制作用 竞争性抑制 非竞争性抑制; 竞争性抑制 非竞争性抑制;竞争性抑制反应机理：;快速平衡法推导动力学方程：;采用稳态法推导动力学方程：;解之，得;非竞争性抑制反应机理;快速平衡法推导动力学方程;稳态法推导动力学方程：;解之，得;竞争性抑制 非竞争性抑制; 竞争性抑制 非竞争性抑制;产物抑制：酶促反应中，有时随产物浓度提高，产物与酶形成复合物，阻碍了底物与酶的结合，从而降低了酶促反应的速度。; ;解之,得;稳态法推导动力学方程:;解之,得;底物抑制：对于某些酶促反应，当底物浓度较高时，反应速率呈下降趋势，称为底物抑制。;底物抑制反应机理：;快速平衡法推导动学方程：;解之,得;2.2.3 多底物酶促反应动力学;一般的多底物酶促反应可表示为：;反应机制：;随机机制（分支机制）;（不形成三元复合物）反应模型;简单机制;双底物酶促反应动力学 反应机理：;;解之，得;2.3 固定化酶促反应动力学; 物理吸附法