细菌代谢产物中小分子有机酸的高效毛细管电泳分析的论文.docVIP

　　细菌代谢产物中小分子有机酸的高效毛细管电泳分析的论文 作者：胡耀华,钟文彬,周林,黄树林 【摘要】 　　目的 建立高效毛细管电泳法测定甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、乳酸的分析方法，测定细菌代谢产物中的小分子有机酸。方法 采用毛细管：beckman coulter未涂层50 μm×60 cm (有效长度50 cm);缓冲溶液：ph 10.5的10 mmol/l(含0.5 mmol/l ctab)的硼砂溶液;检测波长214 nm，分离电压-20 kv，进样压力为1.0 psi，进样时间为10 s。结果 4 min内甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、乳酸得到基线分离。线性范围分别为：甲酸3.8～30.7 mg/l (r=0.997 1);乙酸3.3～52.5 mg/l (r=0.996 1);丙酸3.1～49.5 mg/l (r=0.999 3);丁酸3～48 mg/l (r=0.992 5);乳酸7.5～60.5 mg/l (r=0.999 5)。平均回收率分别为: 甲酸99.29%(rsd=0.67%);乙酸98.90%(rsd=1.36%);丙酸99.65%(rsd=0.65%);丁酸99.35%(rsd=0.42%);乳酸98.06%(rsd=1.44%)。.结论 该方法简单、快速、准确，可用于细菌发酵液中代谢产物有机酸的检测。 【关键词】 细菌代谢产物 小分子有机酸 高效毛细管电泳 abstract:objective to establish a method for determining formic acid,acetic acid,propionic acid,butyric acid and lactic acid in bacterial metabolites by the highperformance capillary electrophoresis. methods samples an coulter (50 μm ×50 cm) uncoated fusedsilica capillary using 10 mmol/l borate buffer ( ph 10.5,containing 0.5 mmol/l ctab). the uv detection ,the separation voltage -20 kv and injection pressure 1.0 psi×10 s. results standard samples of formic acid,acetic acid,propionic acid,butyric acid and lactic acid inutes,and their linear ranges g/l (r=0.997 1),3.3-52.5 mg/l (r=0.996 1),3.1-49.5 mg/l (r=0.999 3),3.0-48.0 mg/l(r=0.992 5),7.5-60.5 mg/l (r=0.999 5),respectively,their average recoveries ic acid,acetic acid,propionic acid,butyric acid and lactic acid ethod is simple,rapid and accurate for detecting the organic acids in bacterial metabolites in fermentation liquor. 　　key etabolic product;organic acid;highperformance capillary electrophoresis 　代谢流量是细胞生理学的一个基本决定因素，也是代谢途径中最重要的参数。对细菌进行代谢流量分析，特别是代谢产物中小分子有机酸的分析，有助于通过基因工程手段定向地、有目的地改变限制细胞代谢的关键途径，以更好地理解和利用细胞代谢进行化学转化、能量转导和活性产物表达[1]。在发酵过程中，产酸发酵细菌能将有机物转化为以脂肪酸和醇为主的末端产物，同时生成新的细胞物质。产酸发酵速率较快，末端产物主要有甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、己酸、乳酸等脂肪酸以及醇类(乙醇等)、二氧化碳、氢气、氨、氮气等[2]。通过分析这些发酵末端产物可以了解细菌的代谢途径，而代谢通量的分析可以使所需要的一些关键操作单元协调运行，从而达到副产物最小而产率最优的目的[3]。 　　毛细管电泳(ce)是一类以毛细管为分离通道，以高压直流电场为驱动力的新型液相分离分析技术，具有效率高、分离检测样本的速度快、所需要的样本和试剂少、检测的模式多且可以和其他技术联用、试剂易得廉价、能够实现自动化的优