骨切片之制作BoneSection.PDFVIP

骨切片之製作 Bone Section 【概說】 骨頭本性堅硬，若欲以切片機切片則需先去除石灰質，即脫鈣(decalcification) ，其中最常用 的方法為酸處理法，步驟較為繁瑣且費時。此外，也可以利用磨刀石製成骨薄片，是為製作骨切片標 本最簡便的方法，但較費力。 【材料】 (1) 材料準備：單面刀片、線鋸、磨刀石、大盆子、圭筆、固定瓶、吸管、載玻片、蓋玻片、顯微鏡 、小培養皿、解剖針、濾紙、40?C恆溫箱、封片用紙板、藥品及容器、標籤及鉛筆。 (2) 藥品準備：10%福馬林、50% Alcohol、75% Alcohol、85% Alcohol、95% Alcohol、100% Alcohol 、Xylene、Hematoxylin、Eosin、 Dist. Water、0.5% HCl acid H2O、 Permount? mounting medium。 【步驟】 (1) 取材與固定： →利用刀片等工具刮除骨肉 →以薄刀口之鋸子切骨???成小片(硬骨約2-5 mm，較軟之骨約4-6 mm) →將骨頭片置於粗面磨刀石上磨至約1 mm厚 →置入裝有10%福馬林之固定瓶中固定約4-24小時 →以水徹底沖洗去除固定液 →將置骨頭片於細面磨刀石上磨至透明 →使用規筆清掃水中之骨頭片以去除卡在細胞間的砂石 →置入70%乙醇中保存 (2) 染色及封片： 使用一般常用之Hematoxylin與Eosin染色法 → 50% Alcohol………………1-2 mins → Dist. H2O………………….1-2 mins → Hematoxylin…………...…1-6 mins ? → Water……………………...10-20 secs → 0.5% HCl acid H2O…...…..few secs ? → Water…………………...…2-3 mins (wash) → 鏡檢：過染則回?；染色不足則回? → Eosin………………………30 secs-3 mins? → Water……………………...10-20 secs → 0.5% HCl acid H2O…...…..few secs ? → Water…………………...…2-3 mins (wash) → 鏡檢：過染則回?；染色不足則回? →70% Alcohol…………….....few secs → 85% Alcohol………….…...1-2 mins → 95% Alcohol…...………….1-2 mins → 100% Alcohol…...………...3-5 mins → 100% Alcohol…...………...3-5 mins → Xylene…...………………...1-3 mins → Xylene…...………………...1-3 mins → Xylene…...………………...1-3 mins → Permount? mounting medium封片 → 貼標籤(以鉛筆書寫) →置於40 ?C恆溫箱約1-3天