实验2饮料中大肠菌群的测定.pptVIP

大肠菌群的定义;大肠杆菌的定义;大肠菌群和大肠杆菌的关系;卫生学意义;大肠杆菌的生物学特性;大肠杆菌的生物学特性;大肠菌群及大肠杆菌测定 ——MPN法检验流程（FDA BAM）;大肠菌群测定——MPN法检验几点说明;大肠杆菌测定——EMB选择性分离鉴别;大肠杆菌测定——EMB选择性分离鉴别;大肠杆菌测定——革兰氏染色;大肠杆菌测定——革兰氏染色;大肠杆菌测定——生化鉴定;实验二 饮料中大肠菌群的测定 一、实验目的 1、学习饮料中大肠菌群检测程序、方法； 2、掌握饮料中大肠菌群检测结果的报告方式。 二、实验材料 1、设备和材料 温箱、水浴锅、天平、显微镜、均质器或乳钵、温度计、平皿、试管、发酵管、吸管、载玻片、接种针 2、培养基及试剂 乳糖—胆盐发酵管、乳糖发酵管、蛋白胨水、靛基质试剂、麦康凯、伊红美蓝琼脂（EMB）、革兰氏染色液;GB4789.3-2010 大肠菌群计数;GB4789.3-2010 大肠菌群计数;;（一）最先准备的器材;（三）应制备的培养基; 蛋白胨20g、胆盐5g、乳糖10g、0.4%溴甲酚紫乙醇溶液25ml、蒸馏水1000ml（将蛋白胨、胆盐及乳糖溶于水中，校正PH值至7.4，加入指示剂）；或购买制好的乳糖胆盐发酵培养基、按说明配置。分装试管，每管10ml，并放入一个到气管（杜氏小管），高压灭菌115℃、15分钟。 双料乳糖胆盐发酵培养基除蒸馏水外，其它成分加倍。 ; 蛋白胨　　　　　　 10.0g 　　乳糖 　　　　　　　10.0g 　　磷酸氢二钾 2.0g 　　琼脂　　　　　　 15.0g　　伊红γ 0.4g　　美蓝　　　　　　　0.065g  或20ml 伊红γ (20g /L)和 10ml 美蓝(6.5 g /L) 　　 蒸馏水　　　　　 1000.0mL　　最终pH7.1±0.2 (25℃) 先将蒸馏水中加入磷酸氢二钾及蛋白胨、乳糖使之溶解，后加琼脂加热溶解，再调pH=7.2-7.4,再加入伊红,美蓝水溶液, 高压灭菌115℃、15分钟。 蛋白胨提供细菌生长发育所需的氮源、维生素和氨基酸，乳糖提供发酵所需的碳源，磷酸氢二钾维持缓冲体系，伊红Y和美蓝抑制绝大部分革兰氏阳性菌的生长。琼脂是凝固剂。 大肠杆菌在EMB上发酵乳糖，形成黑色菌落，大部分有金属光泽。沙门氏菌形成无色菌落。金黄色葡萄球菌基本上不生长。 ;质控： 此培养基呈紫色，可有细微沉淀。质控菌株接种后，35℃培养18～24小时，观察结果应如下表所示： ;说明： （1）伊红又称署红或四溴荧光素，为酸性染料。美蓝又称亚甲蓝，为碱性染料。当大肠杆菌分解乳糖产酸时，细菌带正电荷，染上红色，再与美蓝结合而形成紫黑色菌落，并有绿色金属光泽。二者除了作为指示剂外，还有抑制格兰氏阳性菌的作用。 （2）在碱性环境中，不分解乳糖产酸的细菌不着色。伊红、美蓝不能结合，故沙门氏菌和志贺氏菌等为无色或琥珀色半透明菌落。 （3）此培养基用于鉴别大肠杆菌及产气杆菌，并可快速鉴定白色念珠菌及鉴定凝固酶阳性葡萄球菌。美国公共卫生协会和美国细菌协会推荐，用于增殖或鉴别大肠杆菌的检查。但某些沙门氏菌、志贺氏菌可被抑制。培养基保存应注意避光防止氧化。 ;样品;A1组 酸奶1 ;B1组 鲜奶 ;;;;;;;≤ 3个大肠菌群/1L饮水 ≤ 100个细菌总数/1ml饮水;;;;;