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总糖及还原糖的测定
实验一、总糖和还原糖的测定 ——3,5-二硝基水杨酸法;一、实验目的;二、实验原理;还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物,3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。;在过量的NaOH碱性溶液中, 3-氨基-5-硝基水杨酸呈橘红色,在540nm处有最大吸收,在一定的浓度范围内,还原糖的量与光吸收值成线性关系。利用比色法,在540nm 波长下测定光密度值,查对标准曲线并计算,便可求出样品中还原糖和总糖的含量。;三、实验器材;四、实验试剂;五、操作;2、样品中总糖的水解、提取
;3、制作葡萄糖标准曲线及还原糖、总糖含量的测定。
取8支洁净的试管,分别用记号笔标上0~7号,按照下表进行操作。其中0~5管,用于标准曲线的制作,以吸光度为纵坐标,各标准液浓度(mg/ml)为横坐标作图得标准曲线(用Excel表制作)。
; 管号
试剂;???、计算
C1V1
ω(还原糖)=——×100%
m1
C2V2
ω(总糖)=——×0.9×100%
m2;附:相关仪器使用
1、移液管的使用
2、移液器的使用
3、离心机的使用
注意配平,对称放
4、V-1100可见分光光度计的使用
比色皿;V-1100可见分光光度计;开机预热30min
测吸光度 选择波长(540nm)
MODE键切换到T,将黑体放入光路中
;比色皿的使用
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