微生物基本的操作细则.pptVIP

食品微生物检验规范操作基础培训 1 清洗、消毒和灭菌操作福建出入境检验检疫局技术中心食品所微生物实验室2010.05;主要内容：;§ 1 　清洗、消毒和灭菌操作;1.2　消毒、灭菌;消毒灭菌的方法 ;（一）物理消毒灭菌法;加热灭菌和加热消毒的方法;干热灭菌法;湿热灭菌法;3. 间歇灭菌法（郭霍氏蒸汽消毒）:将待灭菌的物品100℃加热15～30分钟，杀死其中的细菌繁殖体，然后将物品置于37℃温箱中过夜使芽胞发育成繁殖体，次日再通过流通蒸汽加热，如此连续三次，可将所有细菌繁殖体和芽胞全部杀死。针对有点培养基和牛奶、糖等在100℃以上有效成分易被破坏的产品进行灭菌。 4.高压蒸汽灭菌法：是灭菌效果最好、目前应用最广的灭菌方法。方法是在一密闭蒸锅—高压蒸汽灭菌器内进行的。通常采用纯饱和蒸汽压为103.4kPa，温度达121℃,维持15～30分钟，可杀死包括细菌芽胞在内的所有微生物。 适用于各种耐热、体积大的培养基的灭菌，也适用于玻璃器皿、工作服、耐高温塑料用品等物品的灭菌。 ;在高压蒸汽灭菌前要确保高压锅中的所有冷空气已经排空，否则表上的蒸汽压与蒸汽温度之间不具对应关系，这样会大大降低灭菌效果。 定期对灭菌效果进行监测和验证，可采用： 物理监测法（留点温度计法、热电偶法）； 化学指示剂法（化学指示胶带、指示卡等）； 生物指示法（孢子悬液、孢子条带等）监控高压灭菌 的效果。;2.辐射 ;3.滤过除菌;（二）化学消毒法;类 别;有机酸;重金属;接种室、培养室空气熏蒸消毒;影响消毒灭菌效果的因素 ;§2培养基的制备 ;2.1 培养基的分类;天然培养基;合成培养基;半合成培养基 ;固体培养基； 液体培养基； 半固体培养基。;液体培养基;固体培养基;半固体培养基; 运输培养基； 保存培养基； 增菌培养基。;运输培养基;保存培养基;复苏培养基;增菌培养基;分离培养基;鉴别培养基;鉴定培养基;多用途培养基;(1)即用型培养基：以即用形式置于容器中（如平皿、试管或其他容器）供应的培养基。 (2)商品化脱水合成培养基：不立即使用的干粉形式的（如粉末、小颗粒、冻干等形式）培养基。溶于水后能制备成一种或两种类型的培养基： a)完全即用型培养基：不需要添加其他成分的培养基； b)不完全即用型培养基：使用时加入不稳定成分。 ;2.1.5 实验室制备个别成分培养基;2.2培养基的制备;（1）水;（2）称量和复水;（3）溶解和分装;（4）pH的测定和调整;（4）分装;分装容器应预先清洗干净并经干烤消毒，以利于培养基的彻底灭菌。 此外还须用防水纸包扎（目前试管一般多有用螺旋盖，采用金属或塑料试管帽），分装时最好能使用半自动或电动的定量分装器。分装琼脂斜面培养基时，分装量应以能 形成2/3底层和1/3斜面的量为恰当。 每批培养基应另外分装20mL培养基 于一小玻璃瓶中，随该批培养基同时 灭菌，作为测定该批培养基最终pH之用。 ;培养基和试剂的灭菌通常采用湿热灭菌或过滤灭菌。但有些特殊培养基（如嗜盐琼脂培养基、MKTTn、科玛嘉弧菌显色培养基等）只能煮沸灭菌。煮沸后应迅速冷却，避光保存；明胶、血清、糖类等不耐高温的物质，应采取高压锅低温灭菌法（间歇灭菌法）灭菌；有些试剂不需灭菌，可以直接使用（参见相关国际标准或供应商使用说明）。 所有培养基湿热或过滤灭菌后,必须进行监测,尤其是要对pH、颜色、无菌效果和均匀性等指标进行监测。 ; 制备含有有毒物质的添加成分（尤其是抗生素）时，需要特别小心（必要时在通风橱内操作），避免因粉末的扩散造成实验人员过敏或发生其他不良反应。 制备溶液时要特别小心并按产品使用说明操作，不要使用过期的试剂。 对于抗生素工作溶液，应当现用现配。在特定环境下，抗生素溶液应适量分装后冷冻储存，但解冻后的溶液不能再次冷冻，生产厂商应提供冷冻对抗生素活性影响的有关资料，也可由使用者自行测定。 ;2.3培养基的使用 ;(2)培养基的脱气 必要时，将培养基在使用前放到沸水浴或蒸汽浴中加热15min，加热时松开容器的盖子；加热后盖紧盖子，迅速冷却至使用的温度。 (3)添加成分的加入 对热不稳定的添加成分应在培养基冷却至47℃±2℃时再加入。在加入灭菌的添加成分前，先放置到室温，避免冷的液态造成琼脂凝结或形成片状物。将加入培养基的所有添加物缓慢充分混匀，然后尽快分装到要使用的容器中。; (4)培养基斜面和平板培养基的制备和储存 琼脂斜面培养基应在灭菌后立即取出，冷至55℃-60℃时，