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请在使用前仔细阅读说明书 -Cellstain-CFSE 货号 规格 C375 1 mg 荧光染料 CFSE(CFDA-SE)，是一种可对活细胞进行荧光标记的新型染料，可以标记活体细胞。 其基本原理如下：CFSE 是一种带有琥珀酰亚胺(NHS)的荧光染料，可以结合细胞内的蛋白质。CFSE 在结构上将酚羟基部位改造成 AM 体，所以自身不发荧光，荧光背景低，脂溶性高，能够轻易穿透细 胞膜，在活细胞内与胞内蛋白共价结合，进入细胞内的 CFSE 的 AM 部位能被细胞内酯酶水解发出绿 色荧光。CFSE 的琥珀酰亚胺(NHS)和细胞内蛋白质的氨基部位结合，固定在细胞内，不会漏出细胞 外。CFSE 进入细胞后定位于细胞膜、细胞质和细胞核，在细胞核的荧光最强。 在细胞分裂增殖过程中，CFSE 的荧光???度会随着细胞的分裂而逐级递减，标记荧光可平均分 配至两个子代细胞中，因此其荧光强度是亲代细胞的一半，根据这一特性，它可被用于检测细胞增殖， 细胞周期的估算及细胞分裂等方面。 另外，CFSE 标记的细胞用于体内观察可以长达数周之久，它常被用来做活体细胞检测实验和 用荧光电镜观察细胞长期活动的实验。 有报道证实 CFSE 毒性小，不影响细胞的增殖能力。此方法操作简单，且不用放射性同位素， 不存在安全隐患。可以更快速，更准确和更安全地得到想要的实验数据。 荧光波长：λex=496 nm, λem=516 nm 储存条件 运输条件 -20℃ 室温 所需设备 培养箱(37 ℃ CO2) 移液器(20 μl, 1000 μl) 荧光显微镜 (蓝色激发滤光片，绿色发射滤光片) 流式细胞仪(488 nm 光源， 绿色发射滤光片) 实验操作 ＊ 同仁化学研究所需要根据老师具体的实验目的，提供给老师更加详细的技术服务，以保证老 师实验顺利、成功。 ＊ 建议您在正式实验前先摸索一下细胞量、CFSE 的终浓度、培养时间等，找到最佳实验条件。 配制试剂： 1、从冰箱中取出CFSE试剂，放至室温后再打开。盛放CFSE的管子开盖前请轻弹管壁几次，让粉末 充分落入管底，必要时可采用离心的方法。 2、取 0.9 ml DMSOa)加到CFSE管中溶解，配制成 2 mM的CFSE母液b)（加入DMSO后请先盖上盖子， 反复颠倒把盖子和管壁上的试剂洗到底部，并用移液器反复吹打使溶解完全）。 3、用PBS(-)或适当的缓冲液将其稀释成100 μM或其它浓度（如果采用载玻片观察法，建议浓度为20 μM）的工作液c)。 a) DMSO 需要保证新鲜无水，否则将会导致 AM 体水解，使荧光染料无法进入细胞，影响实验效果。 b) 由于CFSE母液遇水极易分解，所以建议分装保存，例如分装成5 μl/管。 方法：分装后用封口膜密封管口，再用锡箔纸包裹，最后和干燥剂一起用塑料袋密封，≦-20℃冷冻保存。 c) CFSE 工作液应现配现用，因为 CFSE 吸水会分解，影响染色效果。 * PBS(-)：不含钙和镁离子的PBS。 细胞染色(仅供参考)： 例 1 培养板观察法 1、准备细胞悬液，用PBS(-)等合适的培养基a)调整细胞浓度至约 107个／ml。 2、取 1 ml细胞悬液至试管中，加入适量CFSE工作液，轻轻搅拌混匀（建议CFSE的终浓度参考相关 论文或做个预实验：分别设定终浓度为 0.5,1,2,5,10,20 μM…,以确定最佳染色浓度b)）。 3、在 37℃培养箱中培养 15-30 分钟。 4、离心后去上清，加入 2 ml PBS 溶液，再离心后去上清，重复此操作一次。 5、加入合适的培养基制成细胞悬液。 6、取500 μl的细胞悬液加在培养孔中，用荧光显微镜观察，看到荧光后，根据自己实验的要求调整 细胞数量c)进行实验。 例2 载玻片观察法