Avr1k及Avr3a的分子鉴定.PDF

微生物学通报 OCT 20, 2012, 39(10): 1533?1539 Microbiology China ? 2012 by Institute of Microbiology, CAS tongbao@ 主编点评文章 大豆疫霉菌(Phytophthora sojae)无毒基因 Avr1a、 Avr1k 及 Avr3a 的分子鉴定 孙龙 文景芝* (东北农业大学 农学院植保系 黑龙江 哈尔滨 150030) 摘 要: 【目的】为大豆疫霉菌(Phytophthora sojae)无毒基因 Avr1a、Avr1k 和 Avr3a 快速 分子检测提供方法, 也为 P. soja e 其它无毒基因的快速分子检测研究提供依据。【方法】依 据 GenBank 中公布的 P. so j a e 无毒基因 Avr1a、Avr1k 和 Avr3a 的序列设计引物, 分别筛选 出特异性引物, 在 PCR 反应体系和扩增条件优化基础上, 对已经接种鉴定过无毒基因 Avr1a、Avr1k 和 Avr3a 的 86 株 P. s o j a e 进行 PCR 检测, 建立一套 P. so j a e 无毒基因 Avr1a、 Avr1k 和 Avr3a 的特异性检测体系。将分子鉴定和接种鉴定结果进行比对, 将扩增出的真 阳性条带和假阳性条带分别进行胶回收和克隆测序, 测序结果分别与 3 个无毒基因的原 序列比对, 判定分子标记方法是否适于 Avr1a、Avr1k 和 Avr3a 的快速检测。【结果】筛选 出的特异性引物均能从含有对应无毒基因的菌株中扩增出约 550 bp 的条带。Avr1a、Avr1k 和 Avr3a 的分子鉴定及接种鉴定结果符合率依次为 45.3%、84.9%和 97.7%。3 个无毒基 因的真阳性条带序列与原序列一致性均达 97%以上, Avr1a 的假阳性条带与原序列一致性 在 80%左右, 其余 2 个基因的都在 30%以下。【结论】利用 Avr1a、Avr1k 和 Avr3a 基因序 列分别设计引物建立的检测体系可以用于 Avr3a 的快速检测, 不适于 Avr1a 的快速检测, 是否适合 Avr1k 的快速检测尚不清楚。 关键词: 大豆疫霉菌, 无毒基因, Avr1a, Avr1k, Avr3a, 分子鉴定 基金项目：公益性行业科研专项项目(No. 201303018) *通讯作者：Tel: 86-451 : jzhwen2000@ 收稿日期：2012-01-30; 接受日期：2012-03-19 1534 微生物学通报